COTプロトーンコタンパク質は、デュアル特異性キナーゼMEK-1とSEK-1を活性化し、PC12細胞の分化を誘導します

原形質膜で開始されたマイトジェンシグナルは、複雑なシグナル伝達ネットワークを介して核に伝達されます。原生性シグナル伝達カスケードの新しいコンポーネントとして、原生動物タンパク質COTを特定しました。これは、古典的な細胞質カスケードとSAPKストレス経路の両方を活性化しました。野生型および活性化COTは、in vitroでMEK-1およびSEK-1をリン酸化して活性化します。これらの発見は、COTとラット遺伝子TPL-2の間の配列相同性と一致しています。293、NIH3T3およびPC12細胞における癌生成COTの発現は、内因性C-JunおよびERK-1/2のin vivoリン酸化につながり、C-Raf-1およびMOSの横にあるMEKの直接活性化因子としてのセリン/スレオニンキナーゼCOTが機能することを示唆しています。-1。さらに、線維芽細胞および神経細胞の表現型に対するCOTの生物学的効果を調べました。COT形質転換の潜在的なC-RAF-1依存性をテストするために、RAF復帰CHP25細胞に対する発癌性COTの効果が決定されました。COTは、COTの変換が活性C-Raf-1に依存せず、COTが推定RAF阻害剤の標的ではないことを示す形質転換された表現型を回復させることができます。RAFの発癌性バージョンとV-MOSの発現は、PC12細胞の分化につながります。COTはまた、PC12細胞の神経突起の成長を誘導します。これらのデータは、古典的なマイトジェンカスケードにおけるCOTの役割と一致しており、同時に活性化されたJNK/SAPKストレス経路がこのコンテキストで拮抗効果がないことを示唆しています。

Mitogenic signals initiated at the plasma membrane are transmitted to the nucleus through an intricate signalling network. We identified the protooncoprotein Cot as a new component of mitogenic signalling cascades, which activates both the classic cytoplasmic cascade and the SAPK stress pathway. Wildtype and activated Cot phosphorylate and activate MEK-1 and SEK-1 in vitro. These findings are consistent with the sequence homology between Cot and the rat gene Tpl-2. Expression of oncogenic Cot in 293, NIH3T3 and PC12 cells leads to in vivo phosphorylation of endogenous c-Jun and Erk-1/2 suggesting that the serine/threonine kinase Cot functions beside c-Raf-1 and Mos as a direct activator of MEK-1. Furthermore, we have examined the biological effects of Cot on the phenotype of fibroblastic and neuronal cells. In order to test a potential c-Raf-1 dependency of Cot transformation, the effect of oncogenic Cot on Raf revertant CHP25 cells was determined. Cot could restore the transformed phenotype indicating that Cot transformation is not dependent on active c-Raf-1 and that Cot is not a target for the putative Raf inhibitor, which is presumably active in the revertant cell line. Expression of oncogenic versions of Raf as well as v-Mos leads to differentiation of PC12 cells. Cot also induces neurite outgrowth of PC12 cells. These data are consistent with the role of Cot in the classic mitogenic cascade and suggest that the simultaneously activated JNK/SAPK stress pathway has no antagonistic effects in this context.