トロンボスポンジン1を介した腫瘍細胞浸潤におけるウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体の役割

私たちは以前、Thrombospondin 1（TSP-1）がプラスミノーゲン/プラスミン系を上方制御し、乳房腫瘍細胞の浸潤を促進することを示しました。中和抗体を使用した我々の研究室からの予備データは、TSP-1に反応して見られる乳房腫瘍細胞浸潤のアップレギュレーションがウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体（UPAR）に関与することを示唆しました。MDA-MB-231乳がん細胞でのこれらの所見を確認するために、腫瘍細胞の接着およびTSP-1を介した腫瘍細胞浸潤におけるUPARの役割を研究するための他の3つの戦略を開発しました：（a）グリコシルホスファチジルイノシトール特異的特異性によるuparの酵素的切断ホスホリパーゼC;（b）uparアンチセンス構造（LKAS-MDAという名前の細胞）を使用したmRNAレベルでの阻害。（c）リジン類似体エプシロン - アミノカプロ酸によるプラスミノーゲン結合の阻害。ラミニンとI型への接着、およびイプシロン - アミノカプロ酸の添加の有無にかかわらず、IV型コラーゲンが研究されました。腫瘍細胞の浸潤は、修正されたボイデンチャンバーコラーゲン浸潤アッセイで研究されました。アンチセンスUPAR阻害は、UPAR発現を48-66％減少させ、細胞関連ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子（UPA）を30-68％減少させました。さらに、アンチセンスUPAR阻害により、UPAおよびプラスミンの活性が68〜70％減少しました。アンチセンス上部トランスフェクションは、腫瘍細胞の接着を46〜53％増加させました。同様の効果は、イプシロン - アミノカプロ酸処理MDA-MB-231細胞で観察されました。TSP-1を介した腫瘍細胞浸潤は、アンチセンス上部阻害またはホスホリパーゼCまたはエプシロン - アミノカプロ酸による治療によってほぼ完全に阻害されました。私たちは、腫瘍細胞の接着とTSP-1を介した腫瘍細胞浸潤の調節において、UPARが重要な役割を果たすと結論付けています。

We previously showed that thrombospondin 1 (TSP-1) upregulates the plasminogen/plasmin system and promotes breast tumor cell invasion. Preliminary data from our laboratory using neutralizing antibodies suggested that the upregulation in breast tumor cell invasion seen in response to TSP-1 involved the urokinase plasminogen activator receptor (uPAR). To confirm these findings in MDA-MB-231 breast cancer cells, we developed three other strategies to study the role of uPAR in tumor cell adhesion and TSP-1-mediated tumor cell invasion: (a) enzymatic cleavage of uPAR with glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase C; (b) inhibition at the mRNA level with a uPAR antisense construct (cells named LKAS-MDA); (c) inhibition of plasminogen binding with the lysine analogue epsilon-aminocaproic acid. Adhesion to laminin and type I and type IV collagen with and without the addition of epsilon-aminocaproic acid was studied. Tumor cell invasion was studied in a modified Boyden chamber collagen invasion assay. Antisense uPAR inhibition decreased uPAR expression by 48-66% and cell-associated urokinase plasminogen activator (uPA) by 30-68%. Additionally, antisense uPAR inhibition induced a 68-70% reduction in uPA and plasmin activities. Antisense uPAR transfection increased tumor cell adhesion by 46-53%. A similar effect was observed in epsilon-aminocaproic acid-treated MDA-MB-231 cells. TSP-1-mediated tumor cell invasion was almost completely inhibited by either antisense uPAR inhibition or treatment with phospholipase C or epsilon-aminocaproic acid. We conclude that uPAR plays a crucial role in the regulation of tumor cell adhesion and TSP-1-mediated tumor cell invasion.