ADP-リボシル化因子（ARF）関連GTPase ARF関連タンパク質は、ARF特異的グアニンヌクレオチド交換因子シトヘシンに結合し、ホスホリパーゼDのARF依存性活性化を阻害します。

ADP-リボシル化因子関連タンパク質（ARP）は、ADPリボシル化因子（ARF）のファミリーとリモート類似性を持つ膜関連GTPaseです。ARPと相互作用するタンパク質を識別するために設計された酵母2ハイブリッドスクリーンでは、そのN末端とほとんどのSEC7ドメイン（コドン1-200）をコードするARF特異的グアニンヌクレオチド交換因子MSEC7-1/シトヘシンの部分cDNAを分離しました。。ARPとARP-Q79L（GTPase陰性ARP）は、2ハイブリッドアッセイでARP-T31N（ヌクレオチド交換防止ARP）よりもMSEC7-1-（1-200）よりも高い親和性を示しました。同様に、フルレングス[35S] MSEC7-1/シトヘシンは、グルタチオンS-トランスフェラーゼ（GST）-ARP-Q79L、GST-ARP、またはGST-ARP-T31Nを搭載したグルタチオンセファロースに特異的に吸着しました。結合親和性。ARP-Q79Lの過剰発現は、ARP-T31Nの過剰発現ではなく、COS-7細胞では、デコンボリューション顕微鏡検査で検出された血漿膜におけるMSEC7-1/シトヘシンまたはMSEC7-2/ARNOと融合した共発現緑色蛍光タンパク質から蛍光を減少させました。ARP-T31Nではなく、組換えARPおよびARP-Q79Lは、分離膜のシステムでMSEC7-2/ARNOおよびARFによって刺激されたホスホリパーゼD（PLD）活性を阻害しました。さらに、ARP-T31NではなくARPまたはARP-Q79Lを使用したHEK-293細胞のトランスフェクションは、ムスカリン性アセチルコリン受容体-3誘導PLD刺激と細胞ゾルから膜へのARFの転座を阻害しました。これらのデータは、ARPのGTP結合型がMSEC7-1/サイトヘシンに特異的に結合し、ARPがPLDのARF制御活性を阻害する経路に関与している可能性があることを示唆しています。

ADP-ribosylation factor-related protein (ARP) is a membrane-associated GTPase with remote similarity to the family of ADP-ribosylation factors (ARF). In a yeast two-hybrid screen designed to identify proteins interacting with ARP, we isolated a partial cDNA of the ARF-specific guanine nucleotide exchange factor mSec7-1/cytohesin encoding its N terminus and most of the Sec7 domain (codons 1-200). ARP and ARP-Q79L (GTPase-negative ARP) exhibited a higher affinity to mSec7-1-(1-200) than ARP-T31N (nucleotide exchange-defective ARP) in the two-hybrid assay. Similarly, full-length [35S]mSec7-1/cytohesin was specifically adsorbed to glutathione-Sepharose loaded with glutathione S-transferase (GST)-ARP-Q79L, GST-ARP, or GST-ARP-T31N, the latter exhibiting the lowest binding affinity. Overexpression of ARP-Q79L, but not of ARP-T31N, in COS-7 cells reduced the fluorescence from co-expressed green fluorescent protein fused with mSec7-1/cytohesin or mSec7-2/ARNO in plasma membranes as detected by deconvolution microscopy. Recombinant ARP and ARP-Q79L, but not ARP-T31N, inhibited the phospholipase D (PLD) activity stimulated by mSec7-2/ARNO and ARF in a system of isolated membranes. Furthermore, transfection of HEK-293 cells with ARP or ARP-Q79L, but not ARP-T31N, inhibited the muscarinic acetylcholine receptor-3 induced PLD stimulation and translocation of ARF from cytosol to membranes. These data suggest that the GTP-bound form of ARP specifically binds mSec7-1/cytohesin, and that ARP may be involved in a pathway inhibiting the ARF-controlled activity of PLD.