ブドウ球菌における高レベルのムピロシン耐性の迅速な検出のためのポリメラーゼ連鎖反応の使用

ムピロシンの最小阻害濃度（MICS）は、E検定（ABバイオディスク、スウェーデン）と107スラフィロコッチの寒天希釈法によって決定されました。生物は、34のコアグラーゼ陰性ブドウ球菌と73のメチシリン耐性黄色ブドウ球菌で構成されていました。これらの分離株からのDNA調製で使用された、プラスミド媒介性イソロシル合成酵素遺伝子（ILES-2）の456 bp領域を増幅するように設計されたポリメラーゼ連鎖反応（PCR）プライマーがこれらの分離株からのDNA調製に使用されました。ILES-2遺伝子による高レベルのムピロシン耐性を持つ分離株は、PCR陽性でなければなりません。Eテストと寒天希釈マイクの値との間には密接な相関があり、2つの連続希釈によって異なる株は2つしかありませんでした。高レベルの耐性株（MIC> 256マイクログ/mL）のほとんど（54株のうち51株）は、テストしたムピロシンの最高濃度（1024マイクログ/mL）に耐性がありました。PCRは、寒天希釈の結果に従って、分離株の4つ（96％）を除くすべてを正しく分類しました。矛盾した結果をもたらした4つの分離株はすべて、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌でした。これらのうち2つはPCR陽性でしたが、これらの株のムピロシンのMICは0.06マイクログ/mL未満でした。長期にわたるインキュベーションでは、寒天拡散試験で阻害ゾーン内でハローを生成し、表現型の結果が誤っていた可能性があることを示唆しています。MICが256マイクログ/mLを超えた54の分離株の1つは、元の方法論でテストされたときにPCR陰性でしたが、低いアニーリング温度を使用して再テストしたときに456 bp bp産物が生成されました。ムピロシンのマイクが寒天希釈で16ミクログ/mlであり、E検定で8マイクログ/mLであった分離株は、PCRによって陽性でした。ILES-2遺伝子のPCRは、ブドウ球菌における高レベルのムピロシン耐性を検出するための有用で迅速な方法です。

The minimum inhibitory concentrations (MICs) of mupirocin were determined by the E test (AB Biodisk, Sweden) and the agar dilution method for 107 staphylococci. The organisms consisted of 34 coagulase-negative staphylococci and 73 methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Polymerase chain reaction (PCR) primers designed to amplify a 456 bp region of the plasmid-borne isoleucyl tRNA synthetase gene (ileS-2), responsible for high-level mupirocin resistance in staphylococci, were used on DNA preparations from these isolates. Isolates with high-level mupirocin resistance due to the ileS-2 gene should be PCR positive. There was close correlation between the E test and agar dilution MIC values, with only two strains differing by more than two serial dilutions. Most (51 of 54 strains) of the high-level resistant strains (MIC>256 microg/ml) were resistant to the highest concentration of mupirocin tested (1024 microg/ml). PCR correctly classified all but four (96%) of the isolates in accordance with the results of agar dilution. All four isolates that gave discrepant results were methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Two of these were PCR positive, yet the MIC of mupirocin for these strains was <0.06 microg/ml; on prolonged incubation they produced halos within the inhibition zone on agar diffusion testing, suggesting that the phenotypic results may have been erroneous. One of 54 isolates for which the MIC exceeded 256 microg/ml was PCR negative when tested by the original methodology, but a 456 bp product was produced when retested using a lowered annealing temperature. One isolate for which the MIC of mupirocin was 16 microg/ml by agar dilution and 8 microg/ml by the E test was positive by PCR. PCR of the ileS-2 gene is a useful, rapid method for detecting high-level mupirocin resistance in staphylococci.