カンピロバクタージェジュニからのCLPBタンパク質：エンコード遺伝子の分子特性と組換えタンパク質の抗原性

CLPB熱ショックタンパク質は、温度が突然上昇すると大腸菌細胞が生存するために必要です。PCRベースのゲノムウォーキング方法を使用して、カンピロバクタージェジュニからのCLPBホモログのヌクレオチド配列が決定されました。CLPB遺伝子は、95.3kDaの予測分子量を持つ857アミノ酸（AA）残基のタンパク質をコードします。推定されたAA配列と他の既知の細菌CLPBタンパク質とのアライメントにより、全体的な同一性が47％（大腸菌）から61％（ピロリHelicobacter）に明らかになりました。Primer Extension分析で示されるように、CLPBプロモーター領域内で、大腸菌Sigma70コンセンサスプロモーターと同一の配列を特定しました。ノーザンブロット分析により、CLPBはC. jejuniで熱誘導性があることが確認されました。6xHisタグに融合したCLPBタンパク質は、大腸菌で合成され、金属親和性とサイズの除外クロマトグラフィーによって精製されました。ELISA研究では、組換えCLPBに反応するIGAレベルは、健康な対照担当者から得られた血清よりも、以前のC. jejuni感染症の患者の血清の方が有意に高かった。

The ClpB heat-shock protein is necessary for the survival of Escherichia coli cells upon sudden increase of temperature. Using a PCR-based genomic walking method, the nucleotide sequence of a clpB homolog from Campylobacter jejuni was determined. The clpB gene encodes a protein of 857 amino acid (aa) residues, with a predicted molecular mass of 95.3kDa. Alignment of the deduced aa sequence with other known bacterial ClpB proteins revealed overall identity from 47% (E. coli) to 61% (Helicobacter pylori). Within the clpB promoter region, as indicated by primer extension analysis, we identified a sequence identical to the E. coli sigma70 consensus promoter. Northern blot analysis confirmed that clpB is heat-inducible in C. jejuni. The ClpB protein, fused to a 6xHis tag, was synthesized in E. coli and purified by metal-affinity and size exclusion chromatography. In ELISA studies, IgA levels reactive to recombinant ClpB were significantly higher in sera of patients with prior C. jejuni infections than in sera obtained from healthy control persons.