転写因子E2F-1は、P53のそれに類似した方法でDNA損傷に応じて上方制御されます

転写因子E2F-1は、細胞分裂を誘導または調節する遺伝子の発現を指示し、E2F-1が細胞をアポトーシスに駆動する役割は、激しい議論の対象です。最近、E2F-1はマウスの二重分析染色体2タンパク質（MDM2）と結合して共沈することが示されています。E2F-1（アミノ酸390〜406）のドメインは、腫瘍抑制タンパク質P53のMDM2結合ドメインと顕著な類似性を示しています。このドメインを介したMDM2とp53との相互作用が、P53のMDM2依存性分解に必要であることが知られています。ここでは、E2F-1タンパク質がDNA損傷に応じて上方制御されることを示します。誘導の速度論は、DNA損傷の原因に依存しています。つまり、X線の照射後の高速かつ一時的なものに依存し、UVCの照射後の遅延および安定したものであり、したがってDNA損傷に応じてp53誘導の動態と一致します。さらに、E2F-1は、転写阻害剤アクチノマイシンDおよびキナーゼ阻害剤DRBで処理することによって、ならびにP53を上方制御するすべての条件であるキナーゼ阻害剤H7の高濃度によっても上方制御されることを示しています。私たちの実験では、E2F-1 RNA産生の増加を見ることができませんでしたが、UVC照射細胞のタンパク質の安定性が増加しました。DNA損傷に応答したE2F-1のアップレギュレーションは、変異したp53を有するいくつかの細胞株でE2F-1タンパク質のレベルの増加を観察しなかったため、野生型p53の存在を必要とするようです。以前の実験では、MDM2とp53と相互作用するために必要なMDM2のドメインに結合する抗体のマイクロインジェクションの後にp53が上方制御されることが示されました。同じ抗体のマイクロインジェクションもE2F-1タンパク質の発現を増加させますが、対照抗体のマイクロインジェクションはそうではありません。さらに、MDM2アンチセンスオリゴヌクレオチドのマイクロインジェクションはE2F-1タンパク質を上方制御しますが、無関係なオリゴヌクレオチドのマイクロインジェクションはそうではありません。これらのデータは、E2F-1がDNA損傷に応じてP53と同様の方法で上方制御され、MDM2がこの経路で大きな役割を果たすように見えることを示唆しています。

The transcription factor E2F-1 directs the expression of genes that induce or regulate cell division, and a role for E2F-1 in driving cells into apoptosis is the subject of intense discussion. Recently it has been shown that E2F-1 binds and coprecipitates with the mouse double-minute chromosome 2 protein (Mdm2). A domain of E2F-1 (amino acids 390 to 406) shows striking similarity to the Mdm2 binding domain of the tumor suppressor protein p53. It is known that interaction of Mdm2 with p53 through this domain is required for Mdm2-dependent degradation of p53. We show here that E2F-1 protein is upregulated in response to DNA damage. The kinetics of induction are dependent upon the source of DNA damage, i.e., fast and transient after irradiation with X rays and delayed and stable after irradiation with UVC, and thus match the kinetics of p53 induction in response to DNA damage. We show further that E2F-1 is also upregulated by treatment with the transcription inhibitor actinomycin D and with the kinase inhibitor DRB, as well as by high concentrations of the kinase inhibitor H7, all conditions which also upregulate p53. In our experiments we were not able to see an increase in E2F-1 RNA production but did find an increase in protein stability in UVC-irradiated cells. Upregulation of E2F-1 in response to DNA damage seems to require the presence of wild-type p53, since we did not observe an increase in the level of E2F-1 protein in several cell lines which possess mutated p53. Previous experiments showed that p53 is upregulated after microinjection of an antibody which binds to a domain of Mdm2 that is required for the interaction of Mdm2 with p53. Microinjection of the same antibody also increases the expression of E2F-1 protein, while microinjection of a control antibody does not. Furthermore, microinjection of Mdm2 antisense oligonucleotides upregulates E2F-1 protein, while microinjection of an unrelated oligonucleotide does not. These data suggest that E2F-1 is upregulated in a similar way to p53 in response to DNA damage and that Mdm2 appears to play a major role in this pathway.