ラットの静止肝星細胞のin vitro移動能と細胞活性化によるその増強

肝臓損傷では、肝臓の星細胞は正弦波壁から出発すると考えられており、移動と増殖を通じて壊死病変に蓄積します。この研究では、in vitroで静止した星細胞の移動能力を調査し、増殖反応との関係を分析しました。細胞培養院の上部チャンバーインサート（ニュージャージー州フランクリンレイクスのベクトンディケンソン）に播種されたばかりの隔離された星細胞は、1日で下部チャンバーに移動し始め、移動指数が2日で19％に増加しました。下室の細胞を多くの脂質液滴で形状に伸ばし、静止特性、すなわち、α体滑らかな筋肉アクチン（アルファ-SMA）または血小板由来成長因子受容体ベータ（PDGFRベータ）の負の発現を示しました。静止した細胞の移動能力は、マトリゲルコーティングされた挿入物にも示されていました。マトリックスメタロプロテイナーゼ-2（MMP-2）メッセンジャーRNA発現は分離直後に低かったが、移動が顕著になるにつれて強化された。移動する細胞は、静止したものよりも高い増殖活性を示しました。PDGF/BBおよびKupffer細胞の存在は、走化性メカニズムによる星の細胞移動を促進し、同時に増殖を増加させたが、デキサメタゾンとインターフェロンガンマ（IFN-GAMMA）の存在は、一般的な抑制効果の結果として移動を減衰させた。静止したものと比較して、14日間の培養によって得られたアルファSMAおよびPDGFR-beta陽性活性化星細胞は、より迅速かつ顕著な移動を示し、前述と同様の方法でメディエーターによって調節されています。これらのデータは、静止した星細胞が移動を受けることを示しており、これは増殖にリンクされ、PDGF/BBおよびKupffer細胞によって強化されており、腸内線維症の発症の初期段階におけるこの機能の関与を示唆しています。

In liver injury, hepatic stellate cells are considered to depart from the sinusoidal wall and accumulate in the necrotic lesion through migration and proliferation. In this study, we investigated the migratory capacity of quiescent stellate cells in vitro and analyzed the relationship with proliferative response. Freshly isolated stellate cells that were seeded in the upper chamber of Cell Culture Insert (Becton Dickenson, Franklin Lakes, NJ) started to migrate to the lower chamber at 1 day and increased in migration index to 19% at 2 days. Cells in the lower chamber were stretched in shape with many lipid droplets and showed quiescent properties, i.e., negative expression of alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA) or platelet-derived growth factor receptor-beta (PDGFR-beta). Migratory capacity in quiescent cells was also shown in the Matrigel-coated insert. Matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) messenger RNA expression was low just after isolation, but was enhanced as migration became prominent. Migrating cells further showed higher proliferative activity than resting ones. The presence of PDGF/BB and Kupffer cells accelerated stellate cell migration by the chemotactic mechanism and concurrently augmented proliferation, whereas that of dexamethasone and interferon-gamma (IFN-gamma) attenuated migration as a result of general suppression effects. Compared with quiescent ones, alpha-SMA and PDGFR-beta-positive activated stellate cells obtained by 14-day culture exhibited more rapid and prominent migration, being regulated by mediators in a similar manner as described previously. These data indicate that quiescent stellate cells undergo migration, which is linked to proliferation and enhanced by PDGF/BB and Kupffer cells, suggesting the involvement of this function in the initial phase of development of postnecrotic fibrosis.