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Virology1999Jun05Vol.258issue(2)

JSRVと内因性プロミスの配列比較:エンベロープ遺伝子型とGタンパク質共役受容体と類似した新規ORF

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, U.S. Gov't, P.H.S.
概要
Abstract

ヒツジの伝染性肺がんであるオーバイン肺癌は、内因性ヒツジのレトロウイルス配列(ESRV)のファミリーと密接に関連する発癌性Jaagsiekteヒツジのレトロウイルス(JSRV)によって引き起こされます。外因性ウイルス特異的U3オリゴヌクレオチドプライマーを使用することにより、JSRVプロビラルゲノム全体またはその3 '部分全体を腫瘍DNAから増幅しました。これらのプロビラルシーケンスの分析により、ESRVおよびJSRVシーケンスでよく保存されているORF Xと指定されたPol Coding領域内の新しいオープンリーディングフレーム(ORF)が明らかになりました。ORF Xの推定アミノ酸は、Gタンパク質共役受容体ファミリーのメンバーである哺乳類アデノシン受容体サブタイプ3の一部と類似性を示しました。3つの大陸からの6つのJSRV株の推定されたENVアミノ酸の比較により、JSRVの2つの異なる遺伝子型を定義する15残基が同定されました。シーケンス分析では、env(TM)の膜貫通ドメインと長期末端繰り返しの3 'ユニークなシーケンス(U3)のJSRVとESRVの間の2つの非常に可変領域を特定し、そこからJSRV固有のDNAプローブが導出されました。これらのDNAプローブを南部のハイブリダイゼーションで使用することにより、複数のESRV遺伝子座の存在下で腫瘍ゲノムDNAのJSRVプロビラル配列を初めて特定し、発癌性プロビラル統合部位の分析における外因性ウイルス特異的DNAプローブの使用を検証しました。統合された外因性プロビラルシーケンスの識別。

ヒツジの伝染性肺がんであるオーバイン肺癌は、内因性ヒツジのレトロウイルス配列(ESRV)のファミリーと密接に関連する発癌性Jaagsiekteヒツジのレトロウイルス(JSRV)によって引き起こされます。外因性ウイルス特異的U3オリゴヌクレオチドプライマーを使用することにより、JSRVプロビラルゲノム全体またはその3 '部分全体を腫瘍DNAから増幅しました。これらのプロビラルシーケンスの分析により、ESRVおよびJSRVシーケンスでよく保存されているORF Xと指定されたPol Coding領域内の新しいオープンリーディングフレーム(ORF)が明らかになりました。ORF Xの推定アミノ酸は、Gタンパク質共役受容体ファミリーのメンバーである哺乳類アデノシン受容体サブタイプ3の一部と類似性を示しました。3つの大陸からの6つのJSRV株の推定されたENVアミノ酸の比較により、JSRVの2つの異なる遺伝子型を定義する15残基が同定されました。シーケンス分析では、env(TM)の膜貫通ドメインと長期末端繰り返しの3 'ユニークなシーケンス(U3)のJSRVとESRVの間の2つの非常に可変領域を特定し、そこからJSRV固有のDNAプローブが導出されました。これらのDNAプローブを南部のハイブリダイゼーションで使用することにより、複数のESRV遺伝子座の存在下で腫瘍ゲノムDNAのJSRVプロビラル配列を初めて特定し、発癌性プロビラル統合部位の分析における外因性ウイルス特異的DNAプローブの使用を検証しました。統合された外因性プロビラルシーケンスの識別。

Ovine pulmonary carcinoma, a contagious lung cancer of sheep, is caused by the oncogenic jaagsiekte sheep retrovirus (JSRV) that is closely related to a family of endogenous sheep retroviral sequences (ESRVs). By using exogenous virus-specific U3 oligonucleotide primers, the entire JSRV proviral genome or its 3' part was amplified from tumor DNA. Analysis of these proviral sequences revealed a novel open reading frame (ORF) within the pol coding region, designated ORF X, which was well conserved in ESRV and JSRV sequences. Deduced amino acids of ORF X showed similarity to a portion of the mammalian adenosine receptor subtype 3, a member of the G-protein-coupled receptor family. Comparison of deduced env amino acids of six JSRV strains from three continents identified 15 residues that defined two distinct genotypes of JSRVs. Sequence analysis identified two highly variable regions between JSRV and ESRV in the transmembrane domain of env (TM) and the 3' unique sequence (U3) of the long terminal repeat, from which JSRV-specific DNA probes were derived. By using these DNA probes in Southern hybridization, for the first time we successfully identified JSRV proviral sequences in tumor genomic DNA in the presence of multiple ESRV loci, validating the use of exogenous virus-specific DNA probes in the analysis of oncogenic proviral integration sites and identification of integrated exogenous proviral sequences.

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