ウサギ膀胱からの筋線維芽細胞および平滑筋細胞におけるSM22アイソフォームの微分発現

平滑筋（SM）特異的SM22タンパク質に飼育されたE-11および1-B8モノクローナル抗体を使用して、筋固芽細胞（MF）およびSM細胞（SMC）のin vivoおよびin vitroの表現型特性を研究しました。膀胱排尿筋筋肉と雄ウサギの漿液性肥厚。SM抽出物で見つかった22 kDa SM22帯域は、非平衡2次元ゲル電気泳動（2D-EF）で調べた場合、異なるアイソフォームで構成されているように見えました：アルファ（最も基本的な）、ベータ、ガンマ、およびデルタ（34（アルファ）の比率で最も酸性）：23（ベータ）：36（ガンマ）：8（delta）。E-11および1-B8で処理した2D電気泳動膀胱抽出物のウエスタンブロットは、アルファ、ベータ、およびデルタではなく、ガンマアイソフォームではないことを示しましたが、アルファ、ベータ、およびガンマアイソフォームは1-で染色されました。B8。この微分免疫反応性は、リン酸化の影響を受けませんでした。SM22免疫染色の組織分布は、膀胱SMで不均一であり、膀胱の部分的な流出閉塞の結果として発生した漿液性肥厚。細胞レベルでは、1-B8およびE-11抗体がSMCを「びまん性」（細胞質全体）と「ハニカム」（末梢細胞質）で染色しましたが、MF免疫染色は非常に均質でした。また、2つの抗体は、不均一なSM22細胞分布を示す低血清条件で成長した培養一次膀胱SMCおよびMFと反応しましたが、同一の細胞内局在、つまり、in vivoで発見されたものと区別できるアクチン含有糸状ネットワークを示します。肥厚した漿膜からのMFの免疫細胞化学、ウエスタンブロッティング、および2D-EFパターンは、この組織でガンマアイソフォームのみが発現していることを示しました。このSM22バリアントは、MFから完全に分化したSMCへの細胞遷移が完了する前に現れました。このパターンは、発達中の膀胱壁でのSM22発現がSMミオシンの発現に先行する膀胱顕微形成を連想させます。これらのデータをまとめると、次のことが示唆されます。（i）SM22アイソフォームは、MF対SMCで異なって異なっています。（ii）SM22は、MFからSMCへの時間関連の細胞表現型の移行を特徴とする実験的条件で発現するため、SMC系列マーカーであり、成人における静電質細胞の細胞変換能力が介して行われる可能性があります。特定の「胎児」遺伝子プログラムの再活性化。

The E-11 and 1-B8 monoclonal antibodies raised to the smooth muscle (SM)-specific SM22 protein from pig stomach were used to study the in vivo and in vitro phenotypic characteristics of myofibroblasts (MF) and SM cells (SMC) from the bladder detrusor muscle and serosal thickening of male rabbit. The 22-kDa SM22 band found in the SM extract appeared to be composed of distinct isoforms when examined in non-equilibrium two-dimensional gel electrophoresis (2D-EF): alpha (the most basic), beta, gamma, and delta (the most acidic) in the ratio of 34(alpha):23(beta):36(gamma):8(delta). Western blots of 2D-electrophoresed bladder extracts treated with E-11 and 1-B8 showed that alpha, beta, and delta, but not gamma isoforms were labeled with E-11, whereas alpha, beta, and gamma isoforms were stained with 1-B8. This differential immunoreactivity was not influenced by phosphorylation. The tissue distribution of SM22 immunostaining was heterogeneous in the bladder SM and serosal thickening developed as a consequence of partial outflow obstruction of the urinary bladder. At the cellular level, the 1-B8 and E-11 antibodies stained the SMC in a "diffuse" (the whole cytoplasm) and "honeycomb" (the peripheral cytoplasm) manner, whereas MF immunostaining was quite homogeneous. The two antibodies also reacted with cultured primary bladder SMC and MF grown in low serum conditions showing a heterogeneous SM22 cell distribution but an identical subcellular localization, i.e., the actin-containing filamentous network, distinguishable in part from that found in vivo. The immunocytochemical, Western blotting and 2D-EF patterns of MF from thickened serosa indicated that the gamma isoform alone is expressed in this tissue. This SM22 variant appeared before the completion of the cellular transition from MF to fully differentiated SMC. This pattern is reminiscent of bladder ontogenesis where SM22 expression in the developing bladder wall precedes that of SM myosin. Taken together these data suggest that: (i) SM22 isoforms are differently assorted in MF vs. SMC; (ii) SM22 is a SMC-lineage marker inasmuch as its expression occurs in an experimental condition characterized by a time-related cell phenotypic transition from MF to SMC, and (iii) cell conversion ability of serosal cells in the adult might take place via the reactivation of a specific "foetal" gene programme.