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Kuタンパク質は、Ku70とKu80の2つのサブユニットの複合体です。KUは、DNA二本鎖切断の修復と転写の両方に参加していると疑われています。これらのプロセスは両方とも細胞核で行われているため、Kuタンパク質の細胞内局在と核輸送を調査しています。本研究では、Ku70の細胞内局在および核局在信号(NLS)を分析しました。細胞で一時的に発現するKu70および緑色蛍光タンパク質(GFP)の融合タンパク質は、間期細胞の核に明確に局在していました。Ku70染色は、初期のG1相細胞から初期のTelphaseにおいて、核と細胞質の両方に分布しました。Ku70のNLSは、18アミノ酸残基(位置539〜556)で構成される領域に位置していました。この領域は、以前に報告されたKu80に依存しないDNA結合ドメインと重複しています。Ku70 NLSは、2つの基本的なサブ領域と非基底介入領域で構成されていました。すべてのサブリージョンは、完全なNLSアクティビティに必要でした。Ku70の非基底介入領域のアミノ酸は、塩基性アミノ酸の2つの分離されたクラスター間で十分な長さを提供するだけでなく、適切なアミノ酸配列を持つために、完全なNLS活性にとって重要である可能性があります。塩基性小領域の塩基性アミノ酸残基はすべて、哺乳類と鳥類のホモログの間で保存されており、Ku70の核移行におけるそれらの重要性を確認しました。Ku70 NLSの構造は、二部型NLSのコンセンサスに似ていました。Ku70 NLSは、核ポアターゲティング複合体PTAC58とPTAC97の2つの成分によって核リムを標的とするように媒介されました。
Kuタンパク質は、Ku70とKu80の2つのサブユニットの複合体です。KUは、DNA二本鎖切断の修復と転写の両方に参加していると疑われています。これらのプロセスは両方とも細胞核で行われているため、Kuタンパク質の細胞内局在と核輸送を調査しています。本研究では、Ku70の細胞内局在および核局在信号(NLS)を分析しました。細胞で一時的に発現するKu70および緑色蛍光タンパク質(GFP)の融合タンパク質は、間期細胞の核に明確に局在していました。Ku70染色は、初期のG1相細胞から初期のTelphaseにおいて、核と細胞質の両方に分布しました。Ku70のNLSは、18アミノ酸残基(位置539〜556)で構成される領域に位置していました。この領域は、以前に報告されたKu80に依存しないDNA結合ドメインと重複しています。Ku70 NLSは、2つの基本的なサブ領域と非基底介入領域で構成されていました。すべてのサブリージョンは、完全なNLSアクティビティに必要でした。Ku70の非基底介入領域のアミノ酸は、塩基性アミノ酸の2つの分離されたクラスター間で十分な長さを提供するだけでなく、適切なアミノ酸配列を持つために、完全なNLS活性にとって重要である可能性があります。塩基性小領域の塩基性アミノ酸残基はすべて、哺乳類と鳥類のホモログの間で保存されており、Ku70の核移行におけるそれらの重要性を確認しました。Ku70 NLSの構造は、二部型NLSのコンセンサスに似ていました。Ku70 NLSは、核ポアターゲティング複合体PTAC58とPTAC97の2つの成分によって核リムを標的とするように媒介されました。
Ku protein is a complex of two subunits, Ku70 and Ku80. Ku is suspected to participate in both DNA double-strand break repair and transcription. Since both of these processes take place in the cell nucleus, we have been investigating the subcellular localization and nuclear transport of Ku proteins. In the present study, we analyzed the subcellular localization and nuclear localization signal (NLS) of Ku70. Fusion proteins of Ku70 and green fluorescent protein (GFP) transiently expressed in cells were clearly localized in the nuclei of interphase cells. Ku70 staining was distributed throughout both the nucleus and the cytoplasm in late telophase to early G1 phase cells. The NLS of Ku70 was located at the region composed of 18 amino acid residues (positions 539 to 556). This region overlapped with the Ku80-independent DNA-binding domain reported previously. The Ku70 NLS consisted of two basic subregions and a nonbasic intervening region. All the subregions were necessary for complete NLS activity. The amino acids in the nonbasic intervening region of Ku70 might be important for full NLS activity not only to provide sufficient length between the two separated clusters of basic amino acids but also to have an adequate amino acid sequence. All of the basic amino acid residues in the basic subregions were conserved among mammalian and avian homologues, confirming their importance in the nuclear translocation of Ku70. The structure of the Ku70 NLS resembled the consensus of a bipartite-type NLS. The Ku70 NLS was mediated to target to the nuclear rim by two components of the nuclear pore-targeting complex, PTAC58 and PTAC97.
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