リゾホスファチジルコリンはCREBをリン酸化し、血管内皮細胞のC-JunプロモーターのJUN2TRE部位を活性化します

アテローム性リポタンパク質およびアテローム性動脈硬化病変で増加した極性リン脂質であるリゾホスファチジルコリン（Lyso-PC）は、アテローム発生に関連するさまざまな内皮遺伝子の転写を誘導することが示されています。Lyso-PCは、C-Jun N末端キナーゼ（JNK）と活性化タンパク質1（AP-1）を活性化し、C-Jun遺伝子の転写を刺激することが示されています。ここでは、Lyso-PCが環状AMP応答性要素結合タンパク質（CREB）をリン酸化できることを示し、それにより、C-JunプロモーターのJun2 12-O-Tetradecanoylphobol 13-アセテート応答要素（jun2tre）部位を活性化できるという証拠を提供します。培養ウシ大動脈内皮細胞（BAEC）におけるLYSO-PC誘導C-Jun遺伝子発現に関与する主要な分子メカニズム。1.6 kbp C-Junプロモーターおよびルシフェラーゼレポーター融合遺伝子によるBAECの一時的なトランスフェクションは、Lyso-PC治療によるルシフェラーゼ活性の12.9倍の増加をもたらしました。C-Junプロモーターおよびルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイの連続欠失変異により、ヌクレオチド数-268と-127の間の5 'プロモーター領域がJun2TRE結合配列を含む5'プロモーター領域が、Lyso-PC誘発転写にとって最も重要であることが明らかになりました。AP-1部位を含む-76と-27の間の5 'プロモーター領域は、C-Jun遺伝子のLYSO-PC誘導転写にも影響を与えました。jun2tre部位の点突然変異は、C-Junプロモーター活性の70.3％減少により、C-Junプロモーター - ルシフェラーゼ融合遺伝子のLYSO-PC誘導転写を減少させました。電気泳動移動度シフトアッセイでは、抗cREB抗体によって廃止または補充されたLYSO-PC処理BAECから分離された核抽出物中のjun2TREを伴う（32）P標識オリゴヌクレオチドの結合の増加を示しました。抗リン酸化CREB抗体による免疫ブロッティングは、LYSO-PC治療後のこのタンパク質の急速なリン酸化を示しました。これらの結果は、LYSO-PCがCREBをリン酸化し、CREBをC-Junプロモーターのjun2tre部位に結合し、転写を活性化したことを示しています。Jun2Treの活性化は、これらの転写因子に応じて、C-Junおよび他の内皮遺伝子の転写活性化に重要な役割を果たす可能性があります。

Lysophosphatidylcholine (lyso-PC), a polar phospholipid increased in atherogenic lipoproteins and atherosclerotic lesions, has been shown to induce transcription of a variety of endothelial genes relevant to atherogenesis. Lyso-PC has been shown to activate c-jun N-terminal kinase (JNK) and activator protein 1 (AP-1) and thereby stimulate transcription of the c-jun gene. Here we provide evidence that lyso-PC can phosphorylate cyclic AMP responsive element binding protein (CREB) and thereby activate the jun2 12-O-tetradecanoylphorbol 13-acetate response element (jun2TRE) site of the c-jun promoter, which appears to be the major molecular mechanism involved in lyso-PC-induced c-jun gene expression in cultured bovine aortic endothelial cells (BAEC). Transient transfection of BAEC with a 1.6-kbp c-jun promoter and luciferase reporter fusion gene resulted in a 12.9-fold increase in luciferase activity by lyso-PC treatment. Serial deletion mutation in c-jun promoter and luciferase reporter gene assay revealed that the 5' promoter region between nucleotide numbers -268 and -127, which contains a jun2TRE binding sequence, was most crucial for lyso-PC-induced transcription. The 5' promoter region between -76 and -27, which contains an AP-1 site, also affected lyso-PC-induced transcription of the c-jun gene. Point mutation in the jun2TRE site reduced lyso-PC-induced transcription of the c-jun promoter-luciferase fusion gene by a 70.3% decrease in c-jun promoter activity. Electrophoretic mobility shift assays showed increased binding of (32)P-labeled oligonucleotides with jun2TRE in nuclear extracts isolated from lyso-PC-treated BAEC, which was abolished or supershifted by anti-CREB antibody. Immunoblotting with anti-phosphorylated CREB antibody showed rapid phosphorylation of this protein after lyso-PC treatment. These results indicate that lyso-PC phosphorylates CREB, which was then bound to the jun2TRE site of the c-jun promoter and activated transcription. Activation of jun2TRE may play a key role in the transcriptional activation of c-jun as well as other endothelial genes depending upon these transcription factors.