ウッドチャック肝炎ウイルスと転写後調節要素を使用したアデノ関連ウイルスベクターからのトランスジェンの発現の強化：遺伝子治療への影響

Woodchuck肝炎ウイルス転写後調節要素（WPRE）は、イントロンのないウイルスメッセージの発現を刺激するために進化しました。この発現を強化する能力が非ウイルス性および異種ウイルス遺伝子送達システムで有用であるかどうかを判断するために、これらの文脈で緑色蛍光タンパク質（GFP）をコードするcDNAの発現を高めるWPREの能力を分析しました。組換えアデノ関連ウイルス（AAV）によるトランスフェクションまたはトランスデューションによって遺伝子が送達される場合、WPREはGFPの発現を刺激できることがわかります。過渡発現中と遺伝子が標的細胞のゲノムに安定して組み込まれているときの両方で増強が発生しました。この強化は、WPREをGFPメッセージ内のCISに配置する必要があり、形質転換された細胞株と一次ヒト線維芽細胞の両方で観察されました。これらの結果は、WPREが遺伝子治療における導入遺伝子の長期発現を増加させるための効果的なツールになることを示しています。

The woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element (WPRE) evolved to stimulate the expression of intronless viral messages. To determine whether this ability to enhance expression could be useful in nonviral and heterologous viral gene delivery systems, we analyzed the ability of the WPRE to elevate the expression of a cDNA encoding the green fluorescent protein (GFP) in these contexts. We find that the WPRE can stimulate the expression of GFP when the gene is delivered by transfection or transduction with recombinant adeno-associated virus (AAV). Enhancement occurred both during transient expression and when the gene is stably incorporated into the genome of target cells. This enhancement required that the WPRE be located in cis within the GFP message, and was observed in both transformed cell lines and primary human fibroblasts. These results demonstrate that the WPRE will be an effective tool for increasing the long-term expression of transgenes in gene therapy.