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Molecular plant-microbe interactions : MPMI1999Oct01Vol.12issue(10)

トウモロコシのストリークウイルスコートタンパク質は核球であり、ウイルスDNAの核輸送を促進します

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

トウモロコシストリークウイルス(MSV)DNAの宿主細胞の核への輸送は、ウイルスの複製に不可欠であり、感染細胞の核内のウイルス粒子の存在は、コートタンパク質(CP)が核に入る必要があることを意味します。他のウイルス遺伝子産物の非存在下でCPが核に輸入されるかどうかを確認するために、MSV CP遺伝子は、バキュロウイルスベクター系を持つ昆虫細胞で、またカリフラワーモザイクウイルス(CAMV)35Sプロモーター駆動型のタバコプロトプラストで発現しました。過渡遺伝子発現ベクター。免疫蛍光染色は、CPが昆虫細胞とタバコ細胞の両方の核に蓄積したことを示しました。CPにおける潜在的な核局在化シグナルの突然変異誘発は、変異タンパク質の細胞質蓄積をもたらしました。CPが一本鎖(SS)および二本鎖(DS)ウイルスDNAに結合することを以前に示しました。CPがウイルスDNA核輸送にも関与している可能性があるかどうかを調査するために、Escherichia Coli-Expressed CPは、TOTO-1標識ウイルスSSまたはDS DNAとともに、トウモロコシおよびタバコの表皮細胞に微小注入されました。SSとDSの両方のDNAは、CPと同時注射すると核に移動しましたが、大腸菌タンパク質だけではありませんでした。これらの結果は、ウイルスSS DNAのカプシド化に必要な核に入ることに加えて、MSV CPがウイルス(SSまたはDS)DNAの核への迅速な輸送を促進することを示唆しています。

トウモロコシストリークウイルス(MSV)DNAの宿主細胞の核への輸送は、ウイルスの複製に不可欠であり、感染細胞の核内のウイルス粒子の存在は、コートタンパク質(CP)が核に入る必要があることを意味します。他のウイルス遺伝子産物の非存在下でCPが核に輸入されるかどうかを確認するために、MSV CP遺伝子は、バキュロウイルスベクター系を持つ昆虫細胞で、またカリフラワーモザイクウイルス(CAMV)35Sプロモーター駆動型のタバコプロトプラストで発現しました。過渡遺伝子発現ベクター。免疫蛍光染色は、CPが昆虫細胞とタバコ細胞の両方の核に蓄積したことを示しました。CPにおける潜在的な核局在化シグナルの突然変異誘発は、変異タンパク質の細胞質蓄積をもたらしました。CPが一本鎖(SS)および二本鎖(DS)ウイルスDNAに結合することを以前に示しました。CPがウイルスDNA核輸送にも関与している可能性があるかどうかを調査するために、Escherichia Coli-Expressed CPは、TOTO-1標識ウイルスSSまたはDS DNAとともに、トウモロコシおよびタバコの表皮細胞に微小注入されました。SSとDSの両方のDNAは、CPと同時注射すると核に移動しましたが、大腸菌タンパク質だけではありませんでした。これらの結果は、ウイルスSS DNAのカプシド化に必要な核に入ることに加えて、MSV CPがウイルス(SSまたはDS)DNAの核への迅速な輸送を促進することを示唆しています。

Transport of maize streak virus (MSV) DNA into the nucleus of host cells is essential for virus replication and the presence of virus particles in the nuclei of infected cells implies that coat protein (CP) must enter the nucleus. To see if CP is imported into the nucleus in the absence of other viral gene products, the MSV CP gene was expressed in insect cells with a baculovirus vector system, and also in tobacco protoplasts with a cauliflower mosaic virus (CaMV) 35S promoter-driven transient gene expression vector. Immunofluorescent staining showed that the CP accumulated in the nuclei of both insect and tobacco cells. Mutagenesis of a potential nuclear localization signal in the CP resulted in cytoplasmic accumulation of the mutant protein. We have shown previously that the CP binds to single-stranded (ss) and double-stranded (ds) viral DNA. To investigate if CP might also be involved in viral DNA nuclear transport, Escherichia coli-expressed CP, together with TOTO-1-labeled viral ss or ds DNA, was microinjected into maize and tobacco epidermal cells. Both ss and ds DNA moved into the nucleus when co-injected with the CP but not with E. coli proteins alone. These results suggest that, in addition to entering the nucleus where it is required for encapsidation of the viral ss DNA, the MSV CP facilitates the rapid transport of viral (ss or ds) DNA into the nucleus.

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