フィブリン凝固レオロジーに対する因子XIIIAの自然および合成阻害剤の影響

FXIIIA依存性の架橋に関連するより大きな血栓剛性の起源を調査しました。フィブリン塊は、2つの阻害剤の使用によって架橋が制御されたものを調べました：FXIIIAの高度に特異的な活性中心指向の合成阻害剤、1,3-ジメチル-4,5-ジフェニル-2 [2（オキソプロピル）チオチオ]イミダゾリウムトリフルオロメチルスルホネート、および主にトロンビン活性化触媒Aのトロンビン活性化FXIIIのサブユニットに向けられた患者由来の免疫グロブリン。架橋フィブリン鎖を同定し、フィブリンのアルファおよびガンマ鎖に特異的な抗体を使用した1次元および2次元ゲル電気泳動および免疫染色によって定量化されました。ガンマダイマー、ガンマ - マルチマー、アルファ（N） - ポリマー、およびアルファ（P）ガンマ（Q）hybridsが検出されました。合成阻害剤は、すべての架橋種の生産を防ぐのに非常に効果的でした。対照的に、患者の自己免疫抗体は、主にアルファ鎖架橋の阻害を引き起こしました。凝固硬性（貯蔵弾性率、G '）は、コーンとプレートのレオメーターで測定され、血栓に見られるさまざまな架橋種の分布と相関しました。我々の発見は、FXIIIAによって誘発されたガンマチェーンの二量体架橋自体がフィブリンネットワークを硬化させるのに十分ではないことを示しています。代わりに、凝固剛性の増強は、ガンママルチマー、アルファ（N） - ポリマー、およびアルファ（P）ガンマ（Q） - ハイブリッドクロスリンクの形成とより強く相関していました。これらの架橋種がどのように凝血硬化を促進するかを説明するためのメカニズムが提案されています。

We investigated the origins of greater clot rigidity associated with FXIIIa-dependent cross-linking. Fibrin clots were examined in which cross-linking was controlled through the use of two inhibitors: a highly specific active-center-directed synthetic inhibitor of FXIIIa, 1,3-dimethyl-4,5-diphenyl-2[2(oxopropyl)thio]imidazolium trifluoromethylsulfonate, and a patient-derived immunoglobulin directed mainly against the thrombin-activated catalytic A subunits of thrombin-activated FXIII. Cross-linked fibrin chains were identified and quantified by one- and two-dimensional gel electrophoresis and immunostaining with antibodies specific for the alpha- and gamma-chains of fibrin. Gamma-dimers, gamma-multimers, alpha(n)-polymers, and alpha(p)gamma(q)-hybrids were detected. The synthetic inhibitor was highly effective in preventing the production of all cross-linked species. In contrast, the autoimmune antibody of the patient caused primarily an inhibition of alpha-chain cross-linking. Clot rigidities (storage moduli, G') were measured with a cone and plate rheometer and correlated with the distributions of the various cross-linked species found in the clots. Our findings indicate that the FXIIIa-induced dimeric cross-linking of gamma-chains by itself is not sufficient to stiffen the fibrin networks. Instead, the augmentation of clot rigidity was more strongly correlated with the formation of gamma-multimers, alpha(n)-polymers, and alpha(p)gamma(q)-hybrid cross-links. A mechanism is proposed to explain how these cross-linked species may enhance clot rigidity.