コアクチベーターペプチドは、エストロゲンおよびエストロゲン受容体とのエストロゲンおよび抗エストロゲンの結合に異なる安定化効果を持っています

エストロゲン受容体（ER）によって媒介される刺激遺伝子転写におけるエストロゲンの有効性は、コアクチベータータンパク質とのER相互作用に依存するようです。これらのコアクチベーターは、エストロゲンアゴニストでリガンド化されたときにERに結合しますが、エストロゲン拮抗薬でリガンド化された場合ではありません。エストロゲンアゴニストは、コアクチベーター結合を安定化するERの立体構造を誘導することが知られているため、ERへのコアクチベーター結合がアゴニストリガンド結合の相互安定化を引き起こすかどうかを尋ねました。ER、テトラヒドロクリセン - ケトンに蛍光リガンドを使用して、エラルファとエルベタからのリガンド解離の速度を監視し、このプロセスがP160クラスのコアクチベーターであるステロイド受容体コアティベーター-1（SRC-1）によってどのように影響を受けるかを確認しました。SRC-1（NR-2ペプチド）の2番目の核内受容体ボックスLXXLLモチーフに対応する15アミノ酸ペプチドを使用しました。-2aペプチド）、およびSrc-1の203-アミノ酸フラグメントは、このタンパク質の3つの内部NRボックスすべてを具体化する核内受容体ドメイン（SRC1-NRD）と呼ばれました。NR-2ペプチドとSRC1-NRDフラグメントの両方が、アゴニストリガンドテトラヒドロクリセンケトン、エストラジオール、ジエチルスチルベストロールの解離速度を著しく遅くし、ERアゴニスト複合体の半減期を50〜60〜60〜60〜60〜60〜60〜60まで増加させます。折り畳み。SRC1-NRDは、NR-2ペプチドよりもリガンド解離の遅れにはるかに高い効力を持っています。これは30 nmで最大効果的であり、ERダイマーごとに1つのSrc1-NRDの化学量論に結合するように見えます。ペプチドは、拮抗薬リガンドの解離速度にほとんど影響を与えませんでした。これらの結果と一致して、SRC-1をコードする発現プラスミドのトランスフェクションによりSrc-1の濃度を増加させると、エストロゲン応答性レポーター遺伝子転写アッセイにおけるエストラジオールの効力が17倍増加することがわかります。したがって、受容体とコアクチベーターの相互作用には多因子制御があり、その強度は、リガンドのアゴニスト対拮抗薬の性質とアゴニストリガンドの特定の構造、および受容体サブタイプとNRボックスシーケンスによって決定されます。ERアゴニストのリガンド複合体に対するコアクチベーターの安定化効果は、細胞内のエストロゲンアゴニストの効力を決定する上で重要である可能性があり、特定の合成エストロゲンの組織選択的薬理学の根底にある場合もあります。

The effectiveness of estrogens in stimulating gene transcription mediated by the estrogen receptor (ER) appears to depend on ER interactions with coactivator proteins. These coactivators bind to ER when it is liganded with an estrogen agonist, but not when it is liganded with an estrogen antagonist. Because estrogen agonists are known to induce a conformation in ER that stabilizes coactivator binding, we asked whether coactivator binding to ER causes a reciprocal stabilization of agonist ligand binding. We used a fluorescent ligand for ER, tetrahydrochrysene-ketone, to monitor the rates of ligand dissociation from ERalpha and ERbeta, and to see how this process is affected by the p160-class coactivator, steroid receptor coactivator-1 (SRC-1). We used a 15-amino acid peptide corresponding to the second nuclear receptor box LXXLL motif in SRC-1 (NR-2 peptide), which is known to interact with the ER ligand-binding domain, a mutant peptide with an LXXAL sequence (NR-2A peptide), and a 203-amino acid fragment of SRC-1, termed the nuclear receptor domain (SRC1-NRD), embodying all three of the internal NR boxes of this protein. Both the NR-2 peptide and the SRC1-NRD fragment markedly slow the rate of dissociation of the agonist ligands tetrahydrochrysene-ketone, estradiol, and diethylstilbestrol, increasing the half-life of the ER-agonist complex by up to 50- to 60-fold. The SRC1-NRD has much higher potency in retarding ligand dissociation than does the NR-2 peptide; it is maximally effective at 30 nM, and it appears to bind with the stoichiometry of one SRC1-NRD per ER dimer. The peptides had little effect on the dissociation rate of antagonist ligands. Consistent with these results, we find that increasing the concentration of SRC-1 in cells by transfection of an expression plasmid encoding SRC-1 causes a 17-fold increase in the potency of estradiol in an estrogen-responsive reporter gene transcription assay. Thus, there is multifactorial control over receptor-coactivator interaction, its strength being determined by the agonist vs. antagonist nature of the ligand and the particular structure of the agonist ligand, and by the receptor subtype and the NR box sequence. The stabilizing effect of coactivator on ER-agonist ligand complexes may be important in determining the potency of estrogen agonists in a cell and may also underlie the tissue-selective pharmacology of certain synthetic estrogens.