脂質関連アポリポタンパク質Jの機能的および構造的特性（Clusterin）

アポリポタンパク質J（Apoj、Clusterin）は、血漿および脳脊髄液の脂質に通常関連する多機能タンパク質であり、肝細胞と星状細胞によってリポ粒子として分泌されます。APOJの構造的および機能的特性が脂質に結合すると調節されるかどうかを調査するために、合成または血漿HDL由来の脂質を使用するAPOJ高密度リポタンパク質（HDL）様粒子を調製しました。得られたリポ粒子の大部分は、粒子ごとに1つの分子のApojの分子を含み、Apoj含有血漿HDLに特徴的な同じアルファ2電気泳動移動度を示しました。粒子のサイズは、脂質混合物中のコレステロールの存在に依存しているようであり、コレステロールの存在下で直径10 nmからコレステロールの非存在下で20 nmまでの範囲でした。CD分析とフーリエ変換赤外線分光法により、リポ粒子への取り込みによって誘発されるAPOJ二次構造の同様の変化、つまりアルファヘリックス含有量の減少とベータターン構造の増加が明らかになりました。アルツハイマー病のアミロイドベータペプチドとの結合相互作用と、補体膜攻撃複合体の阻害活性の2つの機能的アッセイは、脂質化後のApoj活性の変化を検出しませんでした（P> 0.05）。それどころか、細胞受容体メガリンへの結合親和性は、脂質との関連の後に大幅に増強されました（p <0.01）。k（d）値は、脱脂型の場合は78.8 +/- 10.7 nmから37. 0 +/- 7.3 nmに減少しました。観察された構造変化がより高い受容体結合親和性の直接的な原因であるかどうかは不明ですが、データは、補体阻害とアミロイドベータ結合モチーフがアポジメガリンに関与する分子とは異なる分子の領域に位置することを示唆しています。交流。

Apolipoprotein J (apoJ, clusterin) is a multifunctional protein normally associated with lipids in plasma and cerebrospinal fluid, and secreted as lipoparticles by hepatocytes and astrocytes. To investigate whether the structural and functional properties of apoJ are modulated upon binding to lipids, we prepared apoJ high-density lipoprotein (HDL)-like particles employing either synthetic or plasma HDL-derived lipids. The majority of the resulting lipoparticles contained one molecule of apoJ per particle and exhibited the same alpha2 electrophoretic mobility characteristic of apoJ-containing plasma HDL. Particle size seemed to be dependent on the presence of cholesterol in the lipid mixture and ranged from diameters of 10 nm in the presence of cholesterol to 20 nm in the absence of cholesterol. CD analysis and Fourier-transform infrared spectroscopy revealed similar changes in the apoJ secondary structure induced by its incorporation into lipoparticles, namely a decrease in alpha-helix content and an increase in beta-turn structures. Two functional assays, the binding interaction with Alzheimer's amyloid beta peptides and the inhibitory activity of the complement membrane-attack complex, did not detect any changes in apoJ activity following its lipidation (P>0.05). On the contrary, the binding affinity to the cellular receptor megalin was enhanced significantly (P<0.01) after the association with lipids; the K(d) value decreased from 78.8+/-10.7 nM for the delipidated form to 37. 0+/-7.3 nM for apoJ-HDL. Although it is not known whether the structural changes observed are directly responsible for the higher receptor-binding affinity, the data suggest that the complement inhibition and amyloid beta-binding motifs are located in areas of the molecule different from those involved in the apoJ-megalin interaction.