ラパマイシンの哺乳類標的は、プロテインキナーゼBの直接的な標的です：タンパク質翻訳に対するインスリンとアミノ酸欠乏症の反対効果のための収束点の同定

成長因子は、ホスホイノシチド3-キナーゼおよびプロテインキナーゼB（PKB）の活性化を誘導し、ラパマイシン（MTOR）の哺乳類標的の活性の増加につながります。これにより、EIF4E結合タンパク質-1（4EBP1）のリン酸化の増加とp70リボソームS6タンパク質キナーゼ（P70（S6K））の活性化につながります。どちらもタンパク質翻訳の刺激において重要なステップです。翻訳の刺激は、アミノ酸を奪われた細胞で減衰し、これは4EBP1リン酸化とp70（S6K）活性化の減衰に関連しています。PKBによるmTORの直接リン酸化は以前に実証されていないが、PKBはリン酸化によってmTOR機能を調節することが示唆されています。現在の研究では、PKBはmTORを直接リン酸化することがわかりました。リン特異的抗体を使用して、このリン酸化がSer（2448）で発生することを示しました。インスリンはまた、Ser（2448）にリン酸化を誘導し、この効果はワートマニンによってブロックされますが、ラパマイシンではなく、PKBによって媒介される効果と一致しています。アミノ酸の飢starは、MTORによるSer（2448）リン特異的抗体の反応性を急速に減衰させ、これは細胞のインスリン刺激またはin vitroでのPKBとのインキュベーションのいずれでも回復できませんでした。我々の発見は、MTORがPKBの直接的な標的であることを示しており、Ser（2448）のリン酸化の調節が成長因子とアミノ酸レベルの対抗調節効果の収束点であるという結論を支持しています。

Growth factor induced activation of phosphoinositide 3-kinase and protein kinase B (PKB) leads to increased activity of the mammalian target of rapamycin (mTOR). This subsequently leads to increased phosphorylation of eIF4E binding protein-1 (4EBP1) and activation of p70 ribosomal S6 protein kinase (p70(S6K)), both of which are important steps in the stimulation of protein translation. The stimulation of translation is attenuated in cells deprived of amino acids and this is associated with the attenuation of 4EBP1 phosphorylation and p70(S6K) activation. It has been suggested that PKB regulates mTOR function by phosphorylation although direct phosphorylation of mTOR by PKB has not been demonstrated previously. In the present work, we have found that PKB directly phosphorylates mTOR and, using phosphospecific antibodies, we have shown this phosphorylation occurs at Ser(2448). Insulin also induces phosphorylation on Ser(2448) and this effect is blocked by wortmannin but not rapamycin, consistent with the effect being mediated by PKB. Amino-acid starvation rapidly attenuated the reactivity of the Ser(2448) phosphospecific antibody with mTOR and this could not be restored by either insulin stimulation of cells or incubation with PKB in vitro. Our findings demonstrate that mTOR is a direct target for PKB and support the conclusion that regulation of phosphorylation of Ser(2448) is a point of convergence for the counteracting regulatory effects of growth factors and amino acid levels.