培養におけるヒト骨髄間質細胞の伝播と老化：単純なコロニー形成アッセイは、伝播と区別の最大の可能性を持つサンプルを識別します

骨髄間質細胞（MSC）は、通常のボランティアの腸骨紋章の吸引液によって得られた骨髄から分離されました。細胞は、プラスチックへの順守によって分離され、培養に渡されました。一部のサンプルは、凍結された在庫が準備された時点から15を超える細胞倍数を拡大しました。他の人は、約4個の細胞倍長の後に複製をやめました。培養における細胞の複製の可能性は、初期の文章からのサンプルがcm2あたり約10細胞の低密度でメッキされた単純なコロニー形成アッセイによって最もよく予測されました。コロニー形成効率が高いサンプルは、最大の複製の可能性を示しました。低密度で初期の通過細胞を播種することによって得られたコロニーは、サイズと形態が異なりました。大きなコロニーは、適切な培地でインキュベートすると、骨芽細胞と脂肪細胞に容易に分化しました。サンプルが培養で拡大し、老化に近づくと、骨芽細胞に区別する能力を保持しました。しかし、細胞は脂肪細胞に分化できませんでした。培養における連続的な通過後の多能性の喪失は、細胞および遺伝子治療のために拡大したMSCの使用に重要な意味を持つ可能性があります。

Marrow stromal cells (MSCs) were isolated from bone marrow obtained by aspirates of the iliac crest of normal volunteers. The cells were isolated by their adherence to plastic and then passed in culture. Some of the samples expanded through over 15 cell doublings from the time frozen stocks were prepared. Others ceased replicating after about four cell doublings. The replicative potential of the cells in culture was best predicted by a simple colony-forming assay in which samples from early passages were plated at low densities of about 10 cells per cm2. Samples with high colony-forming efficiency exhibited the greatest replicative potential. The colonies obtained by plating early passage cells at low density varied in size and morphology. The large colonies readily differentiated into osteoblasts and adipocytes when incubated in the appropriate medium. As samples were expanded in culture and approached senescence, they retained their ability to differentiate into osteoblasts. However, the cells failed to differentiate into adipocytes. The loss of multipotentiality following serial passage in culture may have important implications for the use of expanded MSCs for cell and gene therapy.