DAP5タンパク質の新しい形態は、カスパーゼの切断と内部リボソーム侵入部位媒介翻訳の結果としてアポトーシス細胞に蓄積します

死に関連するタンパク質5（DAP5）（P97およびNAT1とも呼ばれます）は、EIF4E結合部位を欠く翻訳開始因子4G（EIF4G）ファミリーのメンバーです。それは以前、細胞死に対して保護されたタンパク質の支配的な負の断片が保護されているという発見に基づいて、以前はアポトーシスに関係していた。ここでは、翻訳および翻訳後レベルの両方でタンパク質に影響を与えるアポトーシス中の2つの異なるレベルの調節に対処します。DAP5タンパク質は、活性化されたFASまたはp53に応答して、位置790の単一のカスパーゼ切断部位で切断され、eIF4AおよびEIF3を含む複合体を生成できる86 kDAのC末端切り捨てタンパク質を生成します。興味深いことに、アポトーシス細胞の全体的な翻訳率は60〜70％減少しましたが、CAP依存性翻訳の2つの主要なメディエーターであるEIF4GIとEIF4GIIの同時分解に従って、DAP5タンパク質の翻訳率は選択的に維持されました。DAP5 mRNAの5 '非翻訳領域で、ビシストロンベクターにサブクローニングされたときにレポーター遺伝子の翻訳を指示できる内部リボソームエントリ部位（IRES）要素が誘導されました。このトランスフェクトされたベクターからのキャップ依存性翻訳は、FAS誘発アポトーシス中に減少しましたが、DAP5 IREを介した翻訳は選択的に維持されました。組換えDAP5/P97またはDAP5/P86を無細胞システムに添加すると、DAP5 IRESを介した翻訳が優先的に強化されましたが、この翻訳に干渉した支配的な負のDAP5フラグメントを添加することにより、網状赤血球溶解物における内因性DAP5の中和を拡大しました。これらの機能的アッセイでは、DAP5/P86アポトーシス型はDAP5/P97よりも強力でした。全体として、データは、DAP5が少なくとも独自のIREからCAPに依存しない翻訳を媒介するカスパーゼ活性化翻訳因子であることを示唆しているため、アポトーシス中のDAP5の連続翻訳の原因となる正のフィードバックループを生成します。

Death-associated protein 5 (DAP5) (also named p97 and NAT1) is a member of the translation initiation factor 4G (eIF4G) family that lacks the eIF4E binding site. It was previously implicated in apoptosis, based on the finding that a dominant negative fragment of the protein protected against cell death. Here we address its function and two distinct levels of regulation during apoptosis that affect the protein both at translational and posttranslational levels. DAP5 protein was found to be cleaved at a single caspase cleavage site at position 790, in response to activated Fas or p53, yielding a C-terminal truncated protein of 86 kDa that is capable of generating complexes with eIF4A and eIF3. Interestingly, while the overall translation rate in apoptotic cells was reduced by 60 to 70%, in accordance with the simultaneous degradation of the two major mediators of cap-dependent translation, eIF4GI and eIF4GII, the translation rate of DAP5 protein was selectively maintained. An internal ribosome entry site (IRES) element capable of directing the translation of a reporter gene when subcloned into a bicistronic vector was identified in the 5' untranslated region of DAP5 mRNA. While cap-dependent translation from this transfected vector was reduced during Fas-induced apoptosis, the translation via the DAP5 IRES was selectively maintained. Addition of recombinant DAP5/p97 or DAP5/p86 to cell-free systems enhanced preferentially the translation through the DAP5 IRES, whereas neutralization of the endogenous DAP5 in reticulocyte lysates by adding a dominant negative DAP5 fragment interfered with this translation. The DAP5/p86 apoptotic form was more potent than DAP5/p97 in these functional assays. Altogether, the data suggest that DAP5 is a caspase-activated translation factor which mediates cap-independent translation at least from its own IRES, thus generating a positive feedback loop responsible for the continuous translation of DAP5 during apoptosis.