組換えニュートラライトアビジン：ビオチンに対する高い親和性と低い非特異的結合特性を示す鶏アビジンの非グリコシル化された酸性変異体

アビジンの組換え非グリコシル化および酸性型の形態は、バキュロウイルス感染昆虫細胞で可溶性形態で設計および発現しました。変異は、化学的および酵素的に修飾されたアビジン誘導体の設計を導き、ニュートラライトアビジンとして知られる同じ原理に基づいていました。この新規組換えアビジン誘導体では、8つのアルギニン残基のうち5つを中性アミノ酸に置き換え、2つのリジン残基をグルタミン酸に置き換えました。さらに、炭水化物を含むアスパラギン-17残基は、アビジン関連遺伝子の既知の配列に従って、イソロイシンに変化しました。組換え中性酸アビジンと呼ばれる結果の変異タンパク質は、化学酵素平均によって調製された、アビジン、ストレプトアビジン、および従来のニュートラライトアビジンの特性と比較して優れた特性を示しました。これに関連して、組換え変異体は単一の分子種であり、強力なビオチン結合特性を持っています。その酸性Piのため、DNAおよび細胞への非特異的結合は比較的自由です。組換えニュートラライトアビジンは、サブユニットごとに7つのリジンを保持しており、これはさらに結合と誘導体化に利用できます。

A recombinant non-glycosylated and acidic form of avidin was designed and expressed in soluble form in baculovirus-infected insect cells. The mutations were based on the same principles that guided the design of the chemically and enzymatically modified avidin derivative, known as NeutraLite Avidin. In this novel recombinant avidin derivative, five out of the eight arginine residues were replaced with neutral amino acids, and two of the lysine residues were replaced by glutamic acid. In addition, the carbohydrate-bearing asparagine-17 residue was altered to an isoleucine, according to the known sequences of avidin-related genes. The resultant mutant protein, termed recombinant NeutraLite Avidin, exhibited superior properties compared to those of avidin, streptavidin and the conventional NeutraLite Avidin, prepared by chemo-enzymatic means. In this context, the recombinant mutant is a single molecular species, which possesses strong biotin-binding characteristics. Due to its acidic pI, it is relatively free from non-specific binding to DNA and cells. The recombinant NeutraLite Avidin retains seven lysines per subunit, which are available for further conjugation and derivatization.