フローサイトメトリーによるリポソームサイズ分布の決定

背景：リポソーム懸濁液の品質を記述する重要なパラメーターは、それぞれ平均サイズ、サイズ分布です。現在、レーザー光散乱技術（LLST）を含むいくつかの分析方法が採用されています。 方法：ここでは、フローサイトメトリー（FCM）を使用して、統合および多分散懸濁液を特徴付ける代替手法を提示します。モデルリポソームとして、ジパリトイルホスファチジルコリン（DPPC）を含む調製物を使用しました。流体河川の一定数の粒子（1,500/s）と各サンプルの10,000粒子の代表数が測定されました。蛍光標識ラテックスビーズを同一に測定し、その側散乱シグナルを較正し、リポソーム小胞で得られた結果と相関しました。 結果：FCMの測定と検証の評価は、LLSTと比較して、メソッドで得られた結果の信頼性を確認します。100〜1000 nmの範囲のラテックスビーズをキャリブレーションに使用して、リポソームを分類しました。両方の方法での測定特性と計算は基本的に異なりますが、結果の非常に良い一致が達成されました。 結論：結果の安定性、再現性、および信頼性の実証により、この方法の雇用は適切なルーチン分析手法で受け入れられます。

BACKGROUND: An essential parameter that describes the quality of liposome suspensions is the mean size, respectively the size distribution. Currently several analytical methods including laser light scattering techniques (LLST) are being employed. METHODS: Here we present an alternative technique using flow cytometry (FCM) to characterize uni- and polydisperse suspensions. As model liposomes preparations containing dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) were used. A constant number of particles (1,500/s) in the fluid stream and a representative number of 10,000 particles of each sample was measured. Fluorescence-labeled latex beads were measured identically, and their side scatter signals were calibrated and correlated to the results obtained with liposome vesicles. RESULTS: Evaluation of the measurement and validation of the FCM results in comparison to LLST confirm the reliability of results obtained with our method. Latex beads in the range of 100-1000 nm were used for calibration to classify liposomes. Although measurement characteristics and calculation in both methods are basically different, very good agreement of the results was achieved. CONCLUSIONS: Demonstration of stability, reproducibility, and reliability of results make the employment of this method acceptable for an adequate routine analysis technique.