核酵母DNAポリメラーゼデルタサブユニットCDC27とPCN1（PCNA）の間の本質的な相互作用C末端P21（CIP1）様PCNA結合モチーフを介して媒介する

DNAポリメラーゼデルタとその加工因子増殖細胞核抗原（PCNA）との直接的な相互作用は、真核生物ゲノムの効果的な複製に不可欠ですが、これが発生する正確な方法は不明です。Schizosaccharomyces PombeのDNAポリメラーゼDeltaの54 kDaサブユニットが、in vivoおよびin vitroの両方でPCN1（PCNA）と直接相互作用することを示しています。結合は、哺乳類P21（CIP1）タンパク質で最初に特定された標準PCNA結合モチーフと有意な類似性を持つCDC27のC末端での短い配列を介して行われます。このモチーフは、in vitroでCDC27によるPCN1の結合に必要かつ十分であり、in vivoでのCDC27機能に不可欠です。また、CDC27のPCN1結合モチーフは、ポリメラーゼデルタの55 kDa BサブユニットであるCDC1の結合部位とは異なり、CDC27がPCN1とCDC1に同時に結合できるという証拠を提示することも示しています。最後に、CDC27が少なくとも2つの異なる必須関数を実行することを示します。

Direct interaction between DNA polymerase delta and its processivity factor proliferating cell nuclear antigen (PCNA) is essential for effective replication of the eukaryotic genome, yet the precise manner by which this occurs is unclear. We show that the 54 kDa subunit of DNA polymerase delta from Schizosaccharomyces pombe interacts directly with Pcn1 (PCNA) both in vivo and in vitro. Binding is effected via a short sequence at the C-terminus of Cdc27 with significant similarity to the canonical PCNA binding motif first identified in the mammalian p21(Cip1) protein. This motif is both necessary and sufficient for binding of Pcn1 by Cdc27 in vitro and is essential for Cdc27 function in vivo. We also show that the Pcn1 binding motif in Cdc27 is distinct from its binding site for Cdc1, the 55 kDa B-subunit of polymerase delta, and present evidence that Cdc27 can bind to Pcn1 and Cdc1 simultaneously. Finally, we show that Cdc27 performs at least two distinct essential functions, one of which is independent of Pcn1 binding.