Pseudomonas Maltophilaからのチロシナーゼ遺伝子Melのクローニングと過剰発現

メラニン形成の原因となるチロシナーゼ遺伝子（MEL）は、Pseudomonas Maltophila DNAのSali断片のショットガンクローニングによって分離されました。組換えプラスミドPWSY8の0.7 ​​kbのサリフラグメントは、メラニンを大腸菌宿主HB101に合成する能力を与えました。このDNAフラグメントのヌクレオチド配列は、504 bpのオープンリーディングフレームを明らかにし、169アミノ酸のタンパク質をコードしました。次に、MEL遺伝子を含むフラグメントを、宿主から分離したプロモーターP. maltophilia at18の制御下で、発現プラスミドPPAS1にクローン化されました。この株は、クローン化されたMEL遺伝子がベクターPUC18からのLACプロモーターの制御下にある株HB101/PWSY8と比較して、メラニン産生を70.6％増加させました。

The tyrosinase gene (mel), which is responsible for melanin formation, was isolated by shotgun cloning of SalI fragments of Pseudomonas maltophila DNA. A 0.7-kb SalI fragment in the recombinant plasmid pWSY8 imparted the ability to synthesize melanin to an Escherichia coli host HB101. The nucleotide sequence of this DNA fragment revealed an open reading frame of 504 bp, encoding a protein of 169 amino acids. The fragment containing the mel gene was then cloned into an expression plasmid pPAS1 under the control of a promoter isolated from the host, P. maltophilia AT18. This strain increased the melanin production by 70.6% compared with the strain HB101/pWSY8, in which the cloned mel gene was under the control of the lac promoter from the vector pUC18.