ロドバクタースパヘロイドビオチンスルホキシドレダクターゼのモリブデン部位の構造

大腸菌におけるロドバクタースパハエロイドビオチンスルホキシドレダクターゼの異種発現の条件が修正され、結換酵素の収率が大幅に改善され、モリブデン中心の構造研究が可能になりました。R. sphaeroides DMSOレダクターゼに見られるものと比較したグアニンとモリブデンの定量は、BIS（MGD）モリブデン補因子の存在を示しました。UV可視吸収スペクトルは、酸化、NADPH還元、およびジチオナイト還元酵素について得られました。EPRスペクトルは、酵素のmo（v）状態について得られました。モリブデンKエッジのX線吸収分光法は、酵素のモリブデン協調を調べるために使用されています。酸化タンパク質のモリブデン部位は、2.41 Aで約4つのチオレートリガンド、おそらく1.95 Aで1つの酸素または窒素による追加調整を受けて、MO（VI）モノオキソ部位（MO = O）を所有しています。酵素のジチオナイト還元MO（IV）型は、2.33 Aで約4つのチオール酸塩と2.19および1.94 Aで2つの異なるMo-O/Nリガンドを持つデスオキソモリブデン部位です。

Conditions for heterologous expression of Rhodobacter sphaeroides biotin sulfoxide reductase in Escherichia coli were modified, resulting in a significant improvement in the yield of recombinant enzyme and enabling structural studies of the molybdenum center. Quantitation of the guanine and the molybdenum as compared to that found in R. sphaeroides DMSO reductase demonstrated the presence of the bis(MGD)molybdenum cofactor. UV-visible absorption spectra were obtained for the oxidized, NADPH-reduced, and dithionite-reduced enzyme. EPR spectra were obtained for the Mo(V) state of the enzyme. X-ray absorption spectroscopy at the molybdenum K-edge has been used to probe the molybdenum coordination of the enzyme. The molybdenum site of the oxidized protein possesses a Mo(VI) mono-oxo site (Mo=O at 1.70 A) with additional coordination by approximately four thiolate ligands at 2.41 A and probably one oxygen or nitrogen at 1.95 A. The NADPH- and dithionite-reduced Mo(IV) forms of the enzyme are des-oxo molybdenum sites with approximately four thiolates at 2.33 A and two different Mo-O/N ligands at 2.19 and 1.94 A.