Jurkat細胞における5-Nitro-2-（3-フェニルプロピラミノ） - ベンゾ酸によるCa（2+）放出活性化Ca（2+）チャネルブロックの特性

Ca（2+）放出活性化Ca（2+）電流（I（CRAC））は、以前はJurkatリンパ球やその他の非励起性細胞で生物物理学的に特徴づけられていますが、薬理学は依然としてあまり発達していません。現在の目的は、塩化物チャネル遮断薬5-nitro-2-（3-フェニルプロピラミノ） - ベンゾ酸（NPPB）の相互作用の詳細を記録することで、I（CRAC） - ジャーカット細胞のI（CRAC）を描写することでした。NPPBは、濃度依存的にI（CRAC）を可逆的に阻害しました（IC（50）= 5 microM）。NPPBによるI（CRAC）のブロックとアンブロックの速度論は、二分子相互作用を示しました。Michaelis-Menten分析は、NPPBがI（CRAC）経路に浸透する細胞外Ca（2+）と競合的に相互作用することを示しました。最後に、NPPBによるI（CRAC）ブロックのpH依存性の分析により、NPPBのPK（A）に基づいて、NPPBの中性型がCa（2+）をブロックすることを示唆した細胞外アルカリ化中の見かけの親和性の減少が明らかになりました。リリース活性化Ca（2+）（CRAC）チャネル。まとめると、私たちの結果は、NPPBとCRACチャネル間の直接的な相互作用を示唆しており、新規およびより選択的な類似体を開発するための洞察を導くのに役立つはずです。

Ca(2+) release-activated Ca(2+) current (I(crac)) has been previously characterized biophysically in Jurkat lymphocytes and other non-excitable cells, but pharmacology remains poorly developed. The present objective was to delineate with whole cell recording details of the interaction of the chloride channel blocker, 5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)-benzoic acid (NPPB), with I(crac) in Jurkat cells. NPPB reversibly inhibited I(crac) in a concentration-dependent manner (IC(50)=5 microM). Kinetics for block and unblock of I(crac) by NPPB indicated a bimolecular interaction. Michaelis-Menten analysis indicated that NPPB interacts competitively with extracellular Ca(2+) permeating the I(crac) pathway. Finally, analysis of the pH dependence of I(crac) block by NPPB revealed a reduction in the apparent affinity during extracellular alkalinization that based on the pK(a) for NPPB, suggested that the neutral form of NPPB blocks the Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC) channel. Taken together, our results suggest a direct interaction between NPPB and the CRAC channel, and should help guide insights for developing novel and more selective analogues.