ウサギ門脈の静脈筋細胞におけるノルアドレナリン誘発陽イオン電流を媒介するミオシン軽鎖キナーゼの証拠

ノルアドレナリン誘発性非選択陽イオン電流（ICAT）の活性化におけるミオシン軽鎖キナーゼ（MLCK）の役割を、単一のウサギ門脈平滑筋細胞の全細胞記録技術で調べました。MLCKの基質特異的ペプチド阻害剤である5ミクロムMLCK（11-19）アミドによる細胞内透析は、ノルアドレナリン誘発ICATの振幅と活性化速度を著しく低下させました。同様の結果が、細胞に10 microM AV25で透析されたときに得られました。これは、MLCKの自動阻害ドメインでの作用によってMLCKを阻害します。マイクロモル濃度でのATPのMLCK、ワートマンニンおよび合成ナフタレン症誘導体（ML-7およびML-9）への結合の阻害剤も、ノルアドレナリン誘発ICATの振幅を減少させました。ML-7およびML-9（両方とも5ミクロム）は、グアノシン5'-O-（3-チオトリポン酸）（GTPGAMMAS）と1-オレイル-2-アセチル-Sn-グリセロール（OAG）の両方によって誘導されるICATの振幅を減少させました。。MLCK（11-19）アミド、AV25、およびML-9は、0 mVの保持電位でノルアドレナリン誘発Ca2+活性化カリウム電流を阻害しませんでした。さらに、MLCK（11-19）アミドとAV25は、ウサギ耳動脈細胞でATPによって誘導される非選択的陽イオン電流を減少させませんでした。2ミクロムCa2+および9ミクロムカルモジュリンを活性化したICATを含む細胞内透析は、約5分間にわたって発生しました。ATPの非水溶液性アナログ、5'-アデリリミドジリン酸（AMP-PNP）を使用した細胞内透析により、ノルアドレナリン誘発ICATの活性化の振幅と活性化速度が低下しました。結果は、MLCKがウサギ門脈平滑筋細胞でノルアドレナリン活性化ICATを媒介することを示しています。

The role of myosin light chain kinase (MLCK) in the activation of the noradrenaline-evoked non-selective cation current (Icat) was examined with the whole-cell recording technique in single rabbit portal vein smooth muscle cells. Intracellular dialysis with 5 microM MLCK(11-19)amide, a substrate-specific peptide inhibitor of MLCK, markedly reduced the amplitude and rate of activation of noradrenaline-evoked Icat. A similar result was obtained when the cells were dialysed with 10 microM AV25, which also inhibits MLCK by an action at the auto-inhibitory domain of MLCK. Inhibitors of binding of ATP to MLCK, wortmannin and synthetic naphthalenesulphonyl derivatives (ML-7 and ML-9), at micromolar concentrations, also reduced the amplitude of noradrenaline-evoked Icat. ML-7 and ML-9 (both at 5 microM) reduced the amplitude of Icat induced by both guanosine 5'-O-(3-thiotriphosphate) (GTPgammaS) and 1-oleoyl-2-acetyl-sn-glycerol (OAG). MLCK(11-19)amide, AV25 and ML-9 did not inhibit the noradrenaline-evoked Ca2+-activated potassium current at a holding potential of 0 mV. In addition, MLCK(11-19)amide and AV25 did not reduce the non-selective cation current induced by ATP in rabbit ear artery cells. Intracellular dialysis with 2 microM Ca2+ and 9 microM calmodulin activated Icat, which developed over a period of about 5 min. Intracellular dialysis with the non-hydrolysable analogue of ATP, 5'-adenylylimidodiphosphate (AMP-PNP), reduced the amplitude and rate of activation of noradrenaline-evoked Icat. The results indicate that MLCK mediates noradrenaline-activated Icat in rabbit portal vein smooth muscle cells.