GAA1PおよびGPI8Pは、GPIのタンパク質への付着を媒介するグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）トランスアミダーゼの成分です。

多くの真核細胞表面タンパク質は、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）を介して膜に固定されています。GPIは、カルボキシル末端にGPI付着シグナルペプチドを持つタンパク質に付着しています。GPI付着シグナルペプチドは、カルボニル中間体の形成を介したトランスアミド化反応により、小胞体内の初期包装GPIに置き換えられます。GPIトランスアミダーゼは、この翻訳後修飾の重要な酵素です。ここでは、GAA1PとGPI8PがGPIトランスアミダーゼの成分であることを報告します。GAA1Pの役割を決定するために、相同組換えによりマウスF9細胞のGAA1/GPAA1遺伝子を破壊しました。GAA1ノックアウト細胞は、in vitro Gpi-Quantoringアッセイによって決定されるように、前駆体タンパク質とトランスアミダーゼ間のカルボニル中間体の形成に欠陥がありました。また、システインプロテアーゼファミリーのメンバーに保存されているGPI8Pのシステインおよびヒスチジン残基が、カルボニル中間体の生成に不可欠であることを示しています。この結果は、GPI8PがGPI付着信号ペプチドを切断する触媒成分であることを示唆しています。さらに、GAA1PとGPI8Pは互いに関連付けられています。したがって、GAA1PとGPI8PはGPIトランスアミダーゼを構成し、GPI付着の前提条件であるカルボニル中間体の生成に協力します。

Many eukaryotic cell surface proteins are anchored to the membrane via glycosylphosphatidylinositol (GPI). The GPI is attached to proteins that have a GPI attachment signal peptide at the carboxyl terminus. The GPI attachment signal peptide is replaced by a preassembled GPI in the endoplasmic reticulum by a transamidation reaction through the formation of a carbonyl intermediate. GPI transamidase is a key enzyme of this posttranslational modification. Here we report that Gaa1p and Gpi8p are components of a GPI transamidase. To determine a role of Gaa1p we disrupted a GAA1/GPAA1 gene in mouse F9 cells by homologous recombination. GAA1 knockout cells were defective in the formation of carbonyl intermediates between precursor proteins and transamidase as determined by an in vitro GPI-anchoring assay. We also show that cysteine and histidine residues of Gpi8p, which are conserved in members of a cysteine protease family, are essential for generation of a carbonyl intermediate. This result suggests that Gpi8p is a catalytic component that cleaves the GPI attachment signal peptide. Moreover, Gaa1p and Gpi8p are associated with each other. Therefore, Gaa1p and Gpi8p constitute a GPI transamidase and cooperate in generating a carbonyl intermediate, a prerequisite for GPI attachment.