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この研究では、マウス肝臓のサイトカインによるシトクロムP450（CYP）mRNA調節を研究するために、リアルタイムの定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）法を開発しました。このメソッドは、標準のRT-PCRと蛍光の強度が存在するターゲットテンプレートの量に比例する蛍光プローブと組み合わせます。この方法は、マウスCYP mRNAの非常に迅速で敏感で再現可能な定量化を提供することを示しています。いくつかのプロトタイプのCYPインデューサーを使用して、この方法を検証しました。予想どおり、CYP3A11、CYP2B10、およびCYP1A2のmRNAレベルは、それぞれ1用量のデキサメタゾン（100 mg/kg）、フェノバルビタール（80 mg/kg）、および3-メチルコラントレン（80 mg/kg）によって誘導されました。次に、リアルタイムRT-PCRの方法を使用して、インターロイキン（IL）-6（100 ng/マウス）、IL-1BETA（500 ng/マウス）、および腫瘍壊死因子（TNF）-Alpha（マウスのCYP mRNA発現上の2マイクログラム/マウス）。構成的CYP2B10 mRNAは、IL-6で40％、IL-1BETAで15％に減少しましたが、CYP2D9 mRNAはTNF-alpha投与により70％に減少しました。CYP1A2 mRNAのレベルは、IL-6で67％、TNF-alphaで59％に抑制されました。CYP3A11およびCYP2E1 mRNAは、研究されたサイトカインの影響を受けませんでした。リアルタイムRT-PCRメソッドは、CYP mRNAの発現と調節を研究するための強力な新しいツールであると結論付けています。この方法を使用して、構成的CYP2B10、1A2、および2D9 mRNAの発現が炎症誘発性サイトカインによって抑制されたことを最初に報告しました。
この研究では、マウス肝臓のサイトカインによるシトクロムP450（CYP）mRNA調節を研究するために、リアルタイムの定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）法を開発しました。このメソッドは、標準のRT-PCRと蛍光の強度が存在するターゲットテンプレートの量に比例する蛍光プローブと組み合わせます。この方法は、マウスCYP mRNAの非常に迅速で敏感で再現可能な定量化を提供することを示しています。いくつかのプロトタイプのCYPインデューサーを使用して、この方法を検証しました。予想どおり、CYP3A11、CYP2B10、およびCYP1A2のmRNAレベルは、それぞれ1用量のデキサメタゾン（100 mg/kg）、フェノバルビタール（80 mg/kg）、および3-メチルコラントレン（80 mg/kg）によって誘導されました。次に、リアルタイムRT-PCRの方法を使用して、インターロイキン（IL）-6（100 ng/マウス）、IL-1BETA（500 ng/マウス）、および腫瘍壊死因子（TNF）-Alpha（マウスのCYP mRNA発現上の2マイクログラム/マウス）。構成的CYP2B10 mRNAは、IL-6で40％、IL-1BETAで15％に減少しましたが、CYP2D9 mRNAはTNF-alpha投与により70％に減少しました。CYP1A2 mRNAのレベルは、IL-6で67％、TNF-alphaで59％に抑制されました。CYP3A11およびCYP2E1 mRNAは、研究されたサイトカインの影響を受けませんでした。リアルタイムRT-PCRメソッドは、CYP mRNAの発現と調節を研究するための強力な新しいツールであると結論付けています。この方法を使用して、構成的CYP2B10、1A2、および2D9 mRNAの発現が炎症誘発性サイトカインによって抑制されたことを最初に報告しました。
In this study, we developed a real-time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) method to study cytochrome P450 (CYP) mRNA regulation by cytokines in mouse liver. The method combines standard RT-PCR with a fluorogenic probe in which the intensity of fluorescence is proportional to the amount of target template present. We show that this method provides very rapid, sensitive, and reproducible quantification of mouse Cyp mRNA with a wide dynamic range of starting target molecule. We validated the method by using several prototypic CYP inducers. As expected, the mRNA levels of Cyp3a11, Cyp2b10, and Cyp1a2 were induced by a single dose of dexamethasone (100 mg/kg), phenobarbital (80 mg/kg), and 3-methylcholanthrene (80 mg/kg), respectively. The method of real-time RT-PCR was then used to evaluate the effects of interleukin (IL)-6 (100 ng/mouse), IL-1beta (500 ng/mouse), and tumor necrosis factor (TNF)-alpha (2 microgram/mouse) on Cyp mRNA expression in the mouse. Constitutive Cyp2b10 mRNA was reduced to 40% by IL-6 and 15% by IL-1beta, whereas Cyp2d9 mRNA was reduced to 70% by TNF-alpha administration. The level of Cyp1a2 mRNA was suppressed to 67% by IL-6 and 59% by TNF-alpha. Cyp3a11 and Cyp2e1 mRNAs were not affected by any of the cytokines that were studied. We conclude that the real-time RT-PCR method is a powerful new tool to study CYP mRNA expression and regulation. Using this method, we are the first to report that the expression of constitutive Cyp2b10, 1a2, and 2d9 mRNAs was suppressed by proinflammatory cytokines.
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