ウシラクタダヘリンの2つの細胞結合ドメインの機能分析

糖タンパク質のウシラクタダヘリン（以前はPAS-6/7として知られていました）は、血液凝固因子VおよびVIIIに見られる2つのEGF様ドメインと2つのC様ドメインを含む。ウシラクタダヘリンは、RGD依存的にアルファ（V）ベータ（5）インテグリンに結合し、リン脂質、特にホスファチジルセリンに結合します。これらのバインディングを定義し、特徴付けるために、ラクタダヘリンとさまざまな哺乳類細胞タイプの相互作用を調査しました。ウシラクタダヘリンの組換え型を使用して、アルファ（V）ベータ（5）インテグリン受容体を発現するヒト乳がんMCF-7細胞は、ラクタダヘリンを含むが変異RGEラクタダヘリンを含むRGDに特異的に結合することが示されました。アルファ（V）ベータ（5）インテグリン受容体と合成RGD含有ペプチドに対するモノクローナル抗体は、MCF-7細胞のラクタダヘリンへの接着を阻害しました。アルファ（V）ベータ（3）とアルファ（V）ベータ（5）インテグリンを発現するグリーンモンキー腎臓MA-104細胞は、両方のインテグリンを介してウシラクタダヘリンへの結合を示しました。C1C2ドメインとC2ドメインに対応する脂質とラクタダヘリンと2つの断片の相互作用を調査するために。両方のフラグメントは、ホスファチジルセリンに濃度依存的に結合し、濃度依存的に、ネイティブラクタダヘリン（K（D）= 1.8 nm）に似た親和性を備えています。C2ドメインのC末端部分に対応するペプチドは、濃度依存的にラクタダヘリンのリン脂質への結合を阻害し、最後に、ラクタダヘリンが人工ホスファチジルセリン膜とMCF-7細胞の間の結合を媒介することが示されました。まとめると、これらの結果は、ラクタダヘリンがそのN末端を介してインテグリン受容体とそのC末端を介してリン脂質に結合することにより、2つの表面間のリンクとして作用できることを示しています。

The glycoprotein bovine lactadherin (formerly known as PAS-6/7) comprises two EGF-like domains and two C-like domains found in blood clotting factors V and VIII. Bovine lactadherin binds to alpha(v)beta(5) integrin in an RGD-dependent manner and also to phospholipids, especially phosphatidyl serine. To define and characterize these bindings the interactions between lactadherin and different mammalian cell types were investigated. Using recombinant forms of bovine lactadherin, the human breast carcinomas MCF-7 cells expressing the alpha(v)beta(5) integrin receptor were shown to bind specifically to RGD containing lactadherin but not to a mutated RGE lactadherin. A monoclonal antibody against the alpha(v)beta(5) integrin receptor and a synthetic RGD-containing peptide inhibited the adhesion of MCF-7 cells to lactadherin. Green monkey kidney MA-104 cells, also expressing the alpha(v)beta(3) together with the alpha(v)beta(5) integrin, showed binding to bovine lactadherin via both integrins. To investigate the interaction of lipid with lactadherin two fragments were expressed corresponding to the C1C2 domains and the C2 domain. Both fragments bound to phosphatidyl serine in a concentration-dependent manner with an affinity similar to native lactadherin (K(d) = 1.8 nM). A peptide corresponding to the C-terminal part of the C2 domain inhibited the binding of lactadherin to phospholipid in a concentration-dependent manner, and finally it was shown that lactadherin mediates binding between artificial phosphatidyl serine membranes and MCF-7 cells. Taken together these results show that lactadherin can act as link between two surfaces by binding to integrin receptors through its N-terminus and to phospholipids through its C-terminus.