HPC生存率測定：トリパンブルー対アクリジンオレンジとヨウ化プロピジウム

背景：HPCの生存率を迅速に決定するための信頼できる検証済みの方法は、臨床細胞工学に不可欠です。 研究の設計と方法：アクリジンオレンジとヨウ化プロピジウム（AO/PI）を使用した蛍光細胞生存率アッセイを、現在の標準であるTrypan Blue（TB）除外と比較しました。ダークフィールド蛍光顕微鏡下でAO/Piで染色された生存細胞は緑色で緑色に染まっていますが、生存不可の細胞はオレンジ色に蛍光を発します。新鮮な骨骨髄と熱で殺された骨髄の混合物を調製し、両方のアッセイの評価のための生存率標準として使用しました。CFU-GMの周波数は、各標本に対して決定されました。 結果：AO/PIで測定された細胞生存率は非常に線形であり、生存可能な細胞の0〜100％と0.9921の回帰係数（R（2））の0〜100％に一致して測定および予測された生存率がありました。AO/PI測定の生存率の予測される視界回帰線は、95％CI内に収まりました。TBが測定した生存率の回帰係数は0.9584であり、予測された潜在性回帰線はほぼ完全に95％CIの外側にありました。TBは、特に50％以下の生存細胞の割合を過大評価していました。CFU-GM周波数は、TB（R（2）= 0.930）で測定されたものよりもAO/PI（R（2）= 0.979）で測定された細胞生存率とよりよく相関していました。 結論：AO/PI生体可能性アッセイは、TB除外による従来の生存率測定よりも優れた、迅速で、非常に線形、機能的に相関するアッセイです。

BACKGROUND: A reliable, validated method for rapidly determining HPC viability is essential for clinical cell engineering. STUDY DESIGN AND METHODS: A fluorometric cell viability assay using acridine orange and propidium iodide (AO/PI) was compared to the current standard, trypan blue (TB) exclusion. Viable cells stained with AO/PI fluoresce green under darkfield fluorescence microscopy, while nonviable cells fluoresce orange. Mixtures of fresh and heat-killed bone marrow were prepared and used as viability standards for evaluation of both assays. The frequency of CFU-GM was determined for each specimen. RESULTS: Cell viability measured by AO/PI was extremely linear, with measured and predicted viability in agreement from 0 to 100 percent of the viable cells and a coefficient of regression (r(2)) of 0.9921. The predicted-viability regression line fell within the 95% CI for AO/PI-measured viability. The coefficient of regression for TB-measured viability was 0.9584, with the predicted-viability regression line almost entirely outside the 95% CI. TB overestimated the percentage of viable cells, particularly below the 50-percent level. CFU-GM frequency correlated better with cell viability measured by AO/PI (r(2) = 0.979) than with that measured by TB (r(2) = 0.930). CONCLUSIONS: The AO/PI viability assay is a rapid, highly linear, functionally correlated assay that is superior to conventional viability measurement by TB exclusion.