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293T細胞株に基づいて、Platinum-E（Plat-E）という名前の強力なレトロウイルス包装細胞株が生成されました。Plat-Eは、効率、安定性、安全性に関して、既存の包装細胞株よりも優れています。Plat-eの確立に利用される新しい包装構造は、ウイルス構造タンパク質の高く安定した発現を保証します。ウイルス構造遺伝子GAG-POLおよびENVの発現のためにMULV-LTRのプロモーターを使用した従来のパッケージングコンストラクトは、293T細胞のMULV-LTRよりも100倍強力であるEF1ALPHAプロモーターを利用しました。Kozakのコンセンサスシーケンスが開始コドンの上流にあるため、Plat-E細胞のウイルス構造タンパク質の高発現をもたらします。薬物選択圧力下でレトロウイルスの高い力価を維持するために、GAG-POLまたはENVをコードする遺伝子と、パッケージングコンストラクトの選択可能なマーカーをコードする遺伝子の間にIRES（内部リボソーム侵入部位）シーケンスを挿入しました。Plat-e細胞は、少なくとも4か月間、平均力価の1 x 107/mlのレトロウイルスを安定に生成できます。さらに、ウイルス構造遺伝子のコーディングシーケンスのみを使用して、パッケージングコンストラクトに不必要なレトロウイルスシーケンスを含めることを避けるため、再結合により複製有能なレトロウイルス（RCR）を生成する確率を実質的に除外することができます。
293T細胞株に基づいて、Platinum-E（Plat-E）という名前の強力なレトロウイルス包装細胞株が生成されました。Plat-Eは、効率、安定性、安全性に関して、既存の包装細胞株よりも優れています。Plat-eの確立に利用される新しい包装構造は、ウイルス構造タンパク質の高く安定した発現を保証します。ウイルス構造遺伝子GAG-POLおよびENVの発現のためにMULV-LTRのプロモーターを使用した従来のパッケージングコンストラクトは、293T細胞のMULV-LTRよりも100倍強力であるEF1ALPHAプロモーターを利用しました。Kozakのコンセンサスシーケンスが開始コドンの上流にあるため、Plat-E細胞のウイルス構造タンパク質の高発現をもたらします。薬物選択圧力下でレトロウイルスの高い力価を維持するために、GAG-POLまたはENVをコードする遺伝子と、パッケージングコンストラクトの選択可能なマーカーをコードする遺伝子の間にIRES（内部リボソーム侵入部位）シーケンスを挿入しました。Plat-e細胞は、少なくとも4か月間、平均力価の1 x 107/mlのレトロウイルスを安定に生成できます。さらに、ウイルス構造遺伝子のコーディングシーケンスのみを使用して、パッケージングコンストラクトに不必要なレトロウイルスシーケンスを含めることを避けるため、再結合により複製有能なレトロウイルス（RCR）を生成する確率を実質的に除外することができます。
A potent retrovirus packaging cell line named Platinum-E (Plat-E) was generated based on the 293T cell line. Plat-E is superior to existing packaging cell lines regarding efficiency, stability and safety. The novel packaging constructs utilized in establishment of Plat-E ensure high and stable expression of viral structural proteins. Conventional packaging constructs made use of the promoter of MuLV-LTR for expression of viral structural genes gag-pol and env, while our packaging constructs utilized the EF1alpha promoter, which is 100-fold more potent than the MuLV-LTR in 293T cells in combination with the Kozak's consensus sequence upstream of the initiation codon resulting in high expression of virus structural proteins in Plat-E cells. To maintain the high titers of retroviruses under drug selection pressure, we inserted the IRES (internal ribosome entry site) sequence between the gene encoding gag-pol or env, and the gene encoding a selectable marker in the packaging constructs. Plat-E cells can stably produce retroviruses with an average titer of 1 x 107/ml for at least 4 months. In addition, as we used only the coding sequences of viral structural genes to avoid inclusion of unnecessary retrovirus sequences in the packaging constructs, the probability of generating the replication competent retroviruses (RCR) by recombination can virtually be ruled out.
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