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組換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（ラグCSF）を受けている健康な被験者からの血清は、CD34（+）末梢血前駆細胞（PBPC）を動員しており、最近、マイトジェン性挑戦に対する同種のリンパ球球の反応を誘発することが示されています。現在の調査では、リンパ球の活性化誘発アポトーシスの初期段階およびリンパ球細胞周期侵入に対するラグCSFの影響を評価しました。血清は、同種移植のためにCD34（+）PBPCを動員するために、ラグCSFを受けたHLA同一のドナーから入手しました。正常な末梢血単核細胞（PBMC）は、前（preg）またはRhug-CSF投与後（Postg）後に収集された血清の存在下で、植物ヘマグルチニン（PHA）で挑戦しました。ミトコンドリア機能、つまり、3,3'-ジヘキシオキサカルボシアニンヨウ化物[Dioc（6）（3）]および反応性酸素種（ROS）の生成、およびC-MycおよびBcl-2ファミリーメンバーの発現（Bcl-の発現の組み込み（Bcl-）の組み込み（Bcl-2、Bcl-X（L）、BAX）は、マルチパラメーターフローサイトメトリーによって評価されました。ゲノムDNAの活性化誘導断片化は、非常に敏感なLM-PCRアッセイ（+）Dioc（6）（3）（低）およびCD8（+）Dioc（6）（3）（低）Tリンパ球によって増加して増加して検出されました。ルグCSFの4日目に、循環T細胞のそれぞれ32％（27％〜38％）と20％（範囲15％-23％）に達しました管理。ROSの高生成は、CD4（+）Tリンパ球の65％（範囲58％-82％）、および循環CD8（+）T細胞の0.4％（範囲0.2％-0。8％）で実証できます。Rhug-CSFは、in vitroで同種PBMCに添加された場合、ミトコンドリア機能の変化を決定しないため、可溶性因子によって媒介される間接効果を示唆しています。それどころか、PBMCがpostg血清の存在下でPHAに挑戦された場合、ミトコンドリア膜貫通電位の摂動（デルタプシ（M））とROSの高生成が誘導され、リンパ球が主にG（0）のような相で逮捕されました。細胞周期とゲノムDNA断片化を示した。興味深いことに、CD95に対するブロッキング抗体によるPBMCのプレインキュベーションは、リンパ球デルタプシ（M）の摂動を廃止し、CD95シグナル伝達経路が、後血清の存在下でのPHA刺激後のアポトーシスの誘導に役割を果たす可能性があることを示唆しています。さらに、Baxタンパク質は、preg培養（中央値蛍光強度= 75、範囲68-80; p <0.01）と比較して、Postg（中央値蛍光強度= 180、範囲168-186）で過剰発現しましたが、Bcl-2、Bclの差はありません。-X（L）、およびC-Myc染色強度が観察されました。我々の発見は、リンパ球ミトコンドリアデルタプシ（M）の体液性のラグCSF誘発性散逸を示しています。これらの効果は、BAXの過剰発現によって媒介される可能性があり、アポトーシス促進とアポトーシス阻害Bcl-2ファミリーメンバーの不均衡、およびその後のミトコンドリア透過性移行の誘導があります。同種PBPC移植後の免疫機能障害が急性移植片と宿主疾患の発生率と重症度に好意的に影響するかどうかは、まだ決定されていない。
組換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（ラグCSF）を受けている健康な被験者からの血清は、CD34（+）末梢血前駆細胞（PBPC）を動員しており、最近、マイトジェン性挑戦に対する同種のリンパ球球の反応を誘発することが示されています。現在の調査では、リンパ球の活性化誘発アポトーシスの初期段階およびリンパ球細胞周期侵入に対するラグCSFの影響を評価しました。血清は、同種移植のためにCD34（+）PBPCを動員するために、ラグCSFを受けたHLA同一のドナーから入手しました。正常な末梢血単核細胞（PBMC）は、前（preg）またはRhug-CSF投与後（Postg）後に収集された血清の存在下で、植物ヘマグルチニン（PHA）で挑戦しました。ミトコンドリア機能、つまり、3,3'-ジヘキシオキサカルボシアニンヨウ化物[Dioc（6）（3）]および反応性酸素種（ROS）の生成、およびC-MycおよびBcl-2ファミリーメンバーの発現（Bcl-の発現の組み込み（Bcl-）の組み込み（Bcl-2、Bcl-X（L）、BAX）は、マルチパラメーターフローサイトメトリーによって評価されました。ゲノムDNAの活性化誘導断片化は、非常に敏感なLM-PCRアッセイ（+）Dioc（6）（3）（低）およびCD8（+）Dioc（6）（3）（低）Tリンパ球によって増加して増加して検出されました。ルグCSFの4日目に、循環T細胞のそれぞれ32％（27％〜38％）と20％（範囲15％-23％）に達しました管理。ROSの高生成は、CD4（+）Tリンパ球の65％（範囲58％-82％）、および循環CD8（+）T細胞の0.4％（範囲0.2％-0。8％）で実証できます。Rhug-CSFは、in vitroで同種PBMCに添加された場合、ミトコンドリア機能の変化を決定しないため、可溶性因子によって媒介される間接効果を示唆しています。それどころか、PBMCがpostg血清の存在下でPHAに挑戦された場合、ミトコンドリア膜貫通電位の摂動（デルタプシ（M））とROSの高生成が誘導され、リンパ球が主にG（0）のような相で逮捕されました。細胞周期とゲノムDNA断片化を示した。興味深いことに、CD95に対するブロッキング抗体によるPBMCのプレインキュベーションは、リンパ球デルタプシ（M）の摂動を廃止し、CD95シグナル伝達経路が、後血清の存在下でのPHA刺激後のアポトーシスの誘導に役割を果たす可能性があることを示唆しています。さらに、Baxタンパク質は、preg培養（中央値蛍光強度= 75、範囲68-80; p <0.01）と比較して、Postg（中央値蛍光強度= 180、範囲168-186）で過剰発現しましたが、Bcl-2、Bclの差はありません。-X（L）、およびC-Myc染色強度が観察されました。我々の発見は、リンパ球ミトコンドリアデルタプシ（M）の体液性のラグCSF誘発性散逸を示しています。これらの効果は、BAXの過剰発現によって媒介される可能性があり、アポトーシス促進とアポトーシス阻害Bcl-2ファミリーメンバーの不均衡、およびその後のミトコンドリア透過性移行の誘導があります。同種PBPC移植後の免疫機能障害が急性移植片と宿主疾患の発生率と重症度に好意的に影響するかどうかは、まだ決定されていない。
Sera from healthy subjects receiving recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (rHuG-CSF) to mobilize CD34(+) peripheral blood progenitors (PBPC) have been recently shown to induce unresponsiveness of allogeneic lymphocytes to mitogenic challenge. In the present investigation, the effects of rHuG-CSF on the early stages of lymphocyte activation-induced apoptosis and on lymphocyte cell cycle entry were evaluated. Sera were obtained from HLA-identical donors receiving rHuG-CSF to mobilize CD34(+) PBPC for allogeneic transplantation. Normal peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were challenged with phytohemagglutinin (PHA) in the presence of serum collected before (preG) or after rHuG-CSF administration (postG). Mitochondrial function, that is, incorporation of 3,3'-dihexyloxacarbocyanine iodide [DiOC(6)(3)] and generation of reactive oxygen species (ROS) as well as expression of c-Myc and Bcl-2 family members (Bcl-2, Bcl-X(L), Bax) were evaluated by multiparameter flow cytometry. The activation-induced fragmentation of genomic DNA was detected by highly sensitive LM-PCR assay.CD4(+)DiOC(6)(3)(low) and CD8(+)DiOC(6)(3)(low) T lymphocytes increased and reached 32% (range 27%-38%) and 20% (range 15%-23%) of circulating T cells, respectively, on day 4 of rHuG-CSF administration. Hypergeneration of ROS could be demonstrated in 65% (range 58%-82%) of CD4(+) T lymphocytes and in 0.4% (range 0.2%-0. 8%) of circulating CD8(+) T cells. rHuG-CSF determined no alteration of mitochondrial function if added to allogeneic PBMC in vitro, thus suggesting indirect effects mediated by soluble factors; on the contrary, when PBMC were challenged with PHA in the presence of postG serum, both perturbation of mitochondrial transmembrane potential (Deltapsi(m)) and hypergeneration of ROS were induced, and lymphocytes were predominantly arrested in a G(0) -like phase of the cell cycle and displayed genomic DNA fragmentation. Interestingly, the preincubation of PBMC with a blocking antibody directed against CD95 abrogated the perturbation of lymphocyte Deltapsi(m), suggesting that the CD95 signaling pathway might play a role in the induction of apoptosis after PHA stimulation in the presence of postG serum. Moreover, Bax protein was overexpressed in postG (median fluorescence intensity = 180, range 168-186) compared with preG cultures (median fluorescence intensity = 75, range 68-80; p < 0.01), while no differences in Bcl-2, Bcl-X(L), and c-Myc staining intensity were observed. Our findings demonstrate a humoral-mediated rHuG-CSF-induced dissipation of lymphocyte mitochondrial Deltapsi(m); these effects might be mediated by Bax overexpression, with imbalance between apoptosis-promoting and apoptosis-inhibiting Bcl-2 family members and with subsequent induction of mitochondrial permeability transition. Whether immune dysfunction will favorably impact on incidence and severity of acute graft vs host disease after allogeneic PBPC transplantation remains to be determined.
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