真核生物DNA複製の開始：CDC45、RPA、およびDNAポリメラーゼアルファの起源巻き戻しおよび連続性クロマチン関連

Xenopus Egg抽出物で複製するプラスミドは、複製開始中に負に覆われていることを報告します。スーパーコイリングには、一本鎖DNA結合タンパク質RPAと同様に、開始因子CDC45が必要であるため、おそらく起源の巻き戻しを表しています。巻き戻しが防止されると、CDC45はクロマチンに結合しますが、DNAポリメラーゼアルファはそうではありません。これは、CDC45、RPA、およびDNAポリメラーゼアルファがG1/S遷移でクロマチンを連続的に結合することを示しています。起源巻き戻しの程度は通常制限されていますが、DNAポリメラーゼアルファが阻害されると劇的に増加し、開始中にDNAを解き放つヘリカーゼが複製フォークから切り離される可能性があることを示しています。前提条件の複合体と比較して、複製開始部位の位置に対するこれらの結果の意味について説明します。

We report that a plasmid replicating in Xenopus egg extracts becomes negatively supercoiled during replication initiation. Supercoiling requires the initiation factor Cdc45, as well as the single-stranded DNA-binding protein RPA, and therefore likely represents origin unwinding. When unwinding is prevented, Cdc45 binds to chromatin whereas DNA polymerase alpha does not, indicating that Cdc45, RPA, and DNA polymerase alpha bind chromatin sequentially at the G1/S transition. Whereas the extent of origin unwinding is normally limited, it increases dramatically when DNA polymerase alpha is inhibited, indicating that the helicase that unwinds DNA during initiation can become uncoupled from the replication fork. We discuss the implications of these results for the location of replication start sites relative to the prereplication complex.