プロテアーゼによるアデノウイルスベクターと補完細胞株：ワクチン接種および遺伝子治療のための単一ラウンド複製変異体の潜在的な応用

新しい種類の汎用性の高いアデノウイルスベクター（ADV）が構築されました。これは、AD-E1タンパク質の非存在下で完全に複製されたものですが、AD-E1が存在する場合に1回の複製が可能です。これは、ADプロテアーゼ遺伝子（PS）の削除によって可能になりました。これは、ADライフサイクルの多くのステップに不可欠です。PSによるウイルスは、PSを発現するように設計された293由来の細胞株で伝播できます。これらの新しい補完細胞では、PS遺伝子は、緑色蛍光タンパク質（GFP）を共発現するディシストロニックベクターのテトラサイクリン誘導性プロモーターから発現しました。誘導すると、最高の293-PS安定したクローンは、AD感染後に到達したレベルよりも大きい量でPSを生成しました。生物活性は、機能的に欠陥のあるPSを発現する変異体であるAD2TS1の複製をサポートする293-PS細胞の能力によって最初に実証されました。AD PSの過剰発現は細胞の成長にわずかに影響を与えましたが、AD2TS1を完全に補完するのに十分なレベルでの中程度の発現は293細胞で十分に許容されました。次に、E1/E3に対して削除または削除されていない2つのPSによる変異体が生成され、特性化されました。許容細胞での1ラウンドの複製後の感染性の完全な喪失にもかかわらず、PS誘導変異体は野生型ADと同じくらい多くのウイルスタンパク質を生成しました。したがって、これらの新しいベクトルは、ワクチン接種の場合のように、腫瘍のin situ療法、タンパク質産生、または他のウイルスベクターの大規模生産のように、導入遺伝子発現の強化が望ましい用途に対してより安全で効率的である必要があります。アデノ関連ウイルス（AAV）。

A new kind of versatile adenoviral vector (AdV) has been constructed, one that is completely replication disabled in the absence of Ad-E1 proteins but is capable of a single round of replication when Ad-E1 is present. This was made possible by deletion of the Ad protease gene (PS), which is essential for many steps of the Ad life cycle. The PS-deleted virus can be propagated in 293-derived cell lines engineered to express PS. In these new complementing cells, the PS gene was expressed from a tetracycline-inducible promoter in a dicistronic vector coexpressing the green fluorescent protein (GFP). When induced, the best 293-PS stable clones produced the PS in amounts greater than the level reached after Ad infection. Biological activity was first demonstrated by the ability of 293-PS cells to support the replication of Ad2ts1, a mutant expressing a functionally defective PS. While overexpression of the Ad PS slightly affected cell growth, moderate expression at levels sufficient to fully complement Ad2ts1 was well tolerated in 293 cells. Two PS-deleted mutants, deleted or not deleted for E1/E3, were then generated and characterized. Despite their complete loss of infectivity after a single round of replication in permissive cells, the PS-deleted mutants produced as much viral protein as wildtype Ad. These new vectors should thus be both safer and more efficient for applications in which enhancement of transgene expression is desirable, as in the case of vaccination, in situ therapy for tumors, protein production, or the large-scale production of other viral vectors such as adeno-associated virus (AAV).