CREB結合タンパク質（CBP）/P300およびRNAポリメラーゼII核の転写活性ドメインに共局在する

転写関連タンパク質の空間的構成は、真核生物遺伝子発現の重要な制御メカニズムです。ここでは、共焦点レーザー走査顕微鏡による転写コアクチベーターCREB結合タンパク質（CBP）/P300の核分布を分析し、共免疫沈降による生体内複合体形成を分析しました。CBPおよびP300の亜集団は、転写の活性部位を標的とし、核全体の可変サイズの離散領域における高リン酸化RNAポリメラーゼII（POL II）と部分的に共局在します。しかし、コアクチベーターは、低リン酸化されたPol IIとは異なりませんが、低リン酸化と密接に関連していることがわかりました。転写阻害により、CBP/P300とPOL IIの斑点への移転が誘発されました。さらに、二重およびトリプル免疫蛍光分析により、Prom骨髄球性白血病（PML）体のサブセットにおけるCBP、P300、およびPol IIの存在が明らかになりました。我々の結果は、細胞の転写活性に依存する離散核ドメインにおける転写のコアクチベーターと基礎転写機構との間の動的な空間的リンクの証拠を提供します。CBP/PML含有核体内のPol IIの同定は、PML体で転写が行われるという考えをサポートしています。

The spatial organization of transcription- associated proteins is an important control mechanism of eukaryotic gene expression. Here we analyzed the nuclear distribution of the transcriptional coactivators CREB-binding protein (CBP)/p300 in situ by confocal laser scanning microscopy, and in vivo complex formation by coimmunoprecipitation. A subpopulation of CBP and p300 is targeted to active sites of transcription and partially colocalizes with hyper- and hypophosphorylated RNA polymerase II (pol II) in discrete regions of variable size throughout the nucleus. However, the coactivators were found in tight association with hypophosphorylated, but not hyperphosphorylated pol II. Transcriptional inhibition induced a relocation of CBP/p300 and pol II into speckles. Moreover, double and triple immunofluorescence analyses revealed the presence of CBP, p300, and pol II in a subset of promyelocytic leukemia (PML) bodies. Our results provide evidence for a dynamic spacial link between coactivators of transcription and the basal transcription machinery in discrete nuclear domains dependent upon the transcriptional activity of the cell. The identification of pol II in CBP/PML-containing nuclear bodies supports the idea that transcription takes place at PML bodies.