フラボノイドの高性能液体クロマトグラフィーにおける分光光度およびクロメトリック検出と、オレンジジュースにおけるケルセチンの測定のためのサンプル治療の最適化

フラボノイドの高性能液体クロマトグラフィー測定のために、分光光度および電気化学検出技術の能力を調査しました。液体クロマトグラフィー分析は、フラバノングリコシド、フラボン、フラボノールアグリコンの3つの異なるクラスのフラボノイドに属する11の化合物で実施されました。検査されたすべての化合物の分離は、UV検出のためにC18狭孔カラムの反転相条件下で実行されましたが、電気化学検出の場合、C18標準層カラムが使用されました。UV分析は、フラバノンの場合は280 nm、フラボンとフラボノールでは265 nmで実行されましたが、大量のグラファイト電極を使用して制御されたポテンシャルクロメトリック測定を実行しました。メソッドの分析性能は、線形性、検出限界（LODS）、および精度の観点から比較されました。低PPMレベル（0.06-1 mg/L）での2桁の直線性とLODが、考慮されるすべての手法で実証されました。相対標準偏差に関する機器の精度は、液体クロマトグラフィー（LC）-UVシステムで0〜5％、LC電気化学検出（ED）システムで0.6〜10％であることがわかりました。開発された方法は、オレンジジュースの抽出物などの実際のサンプルのフラバノンとフラボノールの分析に適用されました。ケルセチングリコシドはほとんどがルチンとしてオレンジジュースに存在しますが、このフラボノールの他の異なるグリコシドが存在する可能性があります。これに基づいて、すべてのグリコシドのアグリコンへの加水分解により、オレンジジュースのフラボノール濃度に関するより正確なデータを取得できます。サンプルの分解を回避し、抽出効率を高めるために、抽出回復に対する酸濃度と加水分解時間の影響を調査するために、中央の複合設計を使用してケルセチン加水分解を最適化しました。

The capabilities of spectrophotometric and electrochemical detection techniques were investigated for the high-performance liquid chromatographic determination of flavonoids. Liquid chromatographic analyses were performed on eleven compounds belonging to three different classes of flavonoids: flavanone glycosides, flavone and flavonol aglycones. Separation of all compounds examined was carried out under reversed-phase conditions on a C18 narrow-bore column for UV detection, whereas for electrochemical detection, a C18 standard-bore column was used. UV analyses were carried out at 280 nm for flavanones and at 265 nm for flavones and flavonols, whereas controlled-potential coulometric measurements were performed using a porous graphite electrode. Analytical performances of the methods were compared in terms of linearity, limits of detection (LODs) and precision. Linearity over two orders of magnitude and LODs at low-ppm levels (0.06-1 mg/l) were demonstrated for all techniques considered. Instrumental precision in terms of relative standard deviation was found to be between 0 and 5% for the liquid chromatography (LC)-UV system and between 0.6 and 10% for the LC-electrochemical detection (ED) system. The methods developed were applied to the analysis of flavanones and flavonols in a real sample, such as an extract of orange juice. Even though quercetin glycoside is mostly present in orange juice as rutin, other different glycosides of this flavonol could be present; on this basis, the hydrolysis of all glycosides to aglycone allows one to obtain more accurate data on the flavonol concentration in orange juice. To avoid sample degradation and to increase extraction efficiency, quercetin hydrolysis was optimized using a central composite design to investigate the effects of acid concentration and hydrolysis time on extraction recovery.