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P-セレクチンの一次リガンドであるP-セレクチン糖タンパク質リガンド-1（PSGL-1）は、循環白血球の表面で構成的に発現します。この研究の目的は、PSGL-1発現とP-セレクチンに対するPSGL-1を介した白血球接着に対する白血球活性化の効果を調べることでした。PSGL-1発現は、血小板活性化因子（PAF）およびPMAによる白血球刺激の前後の間接免疫蛍光およびフローサイトメトリーを介して調べられました。ヒト好中球、単球、および好酸球はすべて、ベースラインでPSGL-1の有意な表面発現を持つことが実証され、PAFまたはPMAへの曝露数分以内に減少しました。PSGL-1は、免疫沈降によりPAF活性化好中球の上清で検出されました。式データに加えて、これは細胞表面からのPSGL-1の除去を示唆しています。可溶性PSGL-1は、ヒト気管支肺胞洗浄液でも検出されました。PSGL-1のダウンレギュレーションは、EDTAによって阻害されました。しかし、L-セレクチンの脱落および他のシェダーゼ阻害剤の阻害剤はPSGL-1放出に影響を与えず、PSGL-1がまだ未確認のシェダーゼによって脱落するか、他のメカニズムによって除去される可能性があることを示唆しています。機能的には、PSGL-1のダウンレギュレーションは、静的条件と流れ条件の両方で固定化P-セレクチンに対する好中球接着の減少と関連しており、最も深い影響は流れ条件下で見られます。一緒に、これらのデータは、PSGL-1が活性化白血球の表面から除去できることを示しており、このPSGL-1発現の減少は、特に流れの条件下で、P-セレクチンへの白血球結合に大きな影響を与えることを示しています。
P-セレクチンの一次リガンドであるP-セレクチン糖タンパク質リガンド-1（PSGL-1）は、循環白血球の表面で構成的に発現します。この研究の目的は、PSGL-1発現とP-セレクチンに対するPSGL-1を介した白血球接着に対する白血球活性化の効果を調べることでした。PSGL-1発現は、血小板活性化因子（PAF）およびPMAによる白血球刺激の前後の間接免疫蛍光およびフローサイトメトリーを介して調べられました。ヒト好中球、単球、および好酸球はすべて、ベースラインでPSGL-1の有意な表面発現を持つことが実証され、PAFまたはPMAへの曝露数分以内に減少しました。PSGL-1は、免疫沈降によりPAF活性化好中球の上清で検出されました。式データに加えて、これは細胞表面からのPSGL-1の除去を示唆しています。可溶性PSGL-1は、ヒト気管支肺胞洗浄液でも検出されました。PSGL-1のダウンレギュレーションは、EDTAによって阻害されました。しかし、L-セレクチンの脱落および他のシェダーゼ阻害剤の阻害剤はPSGL-1放出に影響を与えず、PSGL-1がまだ未確認のシェダーゼによって脱落するか、他のメカニズムによって除去される可能性があることを示唆しています。機能的には、PSGL-1のダウンレギュレーションは、静的条件と流れ条件の両方で固定化P-セレクチンに対する好中球接着の減少と関連しており、最も深い影響は流れ条件下で見られます。一緒に、これらのデータは、PSGL-1が活性化白血球の表面から除去できることを示しており、このPSGL-1発現の減少は、特に流れの条件下で、P-セレクチンへの白血球結合に大きな影響を与えることを示しています。
P-selectin glycoprotein ligand-1 (PSGL-1), the primary ligand for P-selectin, is constitutively expressed on the surface of circulating leukocytes. The objective of this study was to examine the effect of leukocyte activation on PSGL-1 expression and PSGL-1-mediated leukocyte adhesion to P-selectin. PSGL-1 expression was examined via indirect immunofluorescence and flow cytometry before and after leukocyte stimulation with platelet activating factor (PAF) and PMA. Human neutrophils, monocytes, and eosinophils were all demonstrated to have significant surface expression of PSGL-1 at baseline, which decreased within minutes of exposure to PAF or PMA. PSGL-1 was detected in the supernatants of PAF-activated neutrophils by immunoprecipitation. Along with the expression data, this suggests removal of PSGL-1 from the cell surface. Soluble PSGL-1 was also detected in human bronchoalveolar lavage fluids. Down-regulation of PSGL-1 was inhibited by EDTA. However, inhibitors of L-selectin shedding and other sheddase inhibitors did not affect PSGL-1 release, suggesting that PSGL-1 may be shed by an as yet unidentified sheddase or removed by some other mechanism. Functionally, PSGL-1 down-regulation was associated with decreased neutrophil adhesion to immobilized P-selectin under both static and flow conditions, with the most profound effects seen under flow conditions. Together, these data indicate that PSGL-1 can be removed from the surface of activated leukocytes, and that this decrease in PSGL-1 expression has profound effects on leukocyte binding to P-selectin, especially under conditions of flow.
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