RNA定量の制御選択

哺乳類の遺伝子発現の研究は、しばしばmRNAのレベルで行われます。このような分析では、通常、ストレス、成長、発達、細胞、組織の局在化などのさまざまな条件下で、または遺伝子トランスフェクションの効果の評価の一部として、対象のmRNAの量を測定します。遺伝子発現を測定するためのさまざまな手法が存在し、最も一般的には北部のハイブリダイゼーション分析、リボヌクレアーゼ保護、またはRT-PCRが含まれます。これらのすべてのアッセイに共通するのは、いわゆる負荷または内部制御（つまり、治療の過程で相対的な存在量が変化しないmRNAの分析）を含めることです。ここでは、これらのコントロールの中で最も人気のあるものの使用と落とし穴であるグリセルアルデヒド3-リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH）およびベータアクチンについて説明します。

The study of mammalian gene expression is often carried out at the level of mRNA. In such analyses, one usually measures the amount of an mRNA of interest under different conditions such as stress, growth, development, cell and tissue localization or as part of an evaluation of the effects of gene transfection. A variety of techniques exist to measure gene expression and most commonly involve Northern hybridization analysis, ribonuclease protection or RT-PCR. Common to all of these assays is the inclusion of a so-called loading or internal control (i.e., analysis of an mRNA that does not change in relative abundance during the course of treatments). Here, we discuss the uses and pitfalls of the most popular of these controls, glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and beta-actin, with special emphasis on precautions associated with the use of GAPDH.