大腸菌のDNAAおよびDNAB複製タンパク質の相互作用ドメイン

大腸菌における染色体複製の開始には、ORIC結合イニシエータータンパク質DNAAによってサポートされている複製起源ORIC内のDNABC複合体からの複製ヘリカーゼDNABの動員が必要です。DNAAとDNABの残留物と130-148とDNABの残基154-210および1-156を含むDNAAとDNABの間の物理的接触を定義しました。DNAAとDNAB間の接触は、各タンパク質の2つの相互作用部位を介して発生することを提案します。DNAAの相互作用ドメイン24-86は、そのN末端ホモオリゴマー化ドメイン（残基1-86）と重複しています。DNABの相互作用ドメイン154-210は、プラスミドイニシエータータンパク質と相互作用することが知られているドメインと隣接しています。in vivoでのDNABCヘリカーゼの負荷は、（残基24-86およびDNA結合ドメイン4に加えて）構造的に無傷のドメイン3を含むDNAA誘導体によってのみ実行できます。PSC101の複製に必要なDNAAの部分は、ヘリカーゼの負荷に使用されるものとは明らかに異なっていました。DNAAのドメイン1と4は、ドメイン3ではなく、プラスミドPSC101の維持に関与していることがわかりました。

The initiation of chromosome replication in Escherichia coli requires the recruitment of the replicative helicase DnaB from the DnaBC complex to the unwound region within the replication origin oriC, supported by the oriC-bound initiator protein DnaA. We defined physical contacts between DnaA and DnaB that involve residues 24-86 and 130-148 of DnaA and residues 154-210 and 1-156 of DnaB respectively. We propose that contacts between DnaA and DnaB occur via two interaction sites on each of the proteins. Interaction domain 24-86 of DnaA overlaps with its N-terminal homo-oligomerization domain (residues 1-86). Interaction domain 154-210 of DnaB overlaps or is contiguous with the domains known to interact with plasmid initiator proteins. Loading of the DnaBC helicase in vivo can only be performed by DnaA derivatives containing (in addition to residues 24-86 and the DNA-binding domain 4) a structurally intact domain 3. Nucleotide binding by domain 3 is, however, not required. The parts of DnaA required for replication of pSC101 were clearly different from those used for helicase loading. Domains 1 and 4 of DnaA, but not domain 3, were found to be involved in the maintenance of plasmid pSC101.