大腸菌の呼吸鎖へのタンパク質ジスルフィド結合融合経路をリンクする際のDSBBの保存されたアルギニン残基の役割

DSBAの活性部位システイン、大腸菌のペリプラズムジスルフィド結合酵素酵素は、細胞質膜タンパク質DSBBによって酸化されています。DSBBは、電子輸送鎖で2種類のキノン（好気性のユビキノンと嫌気性成長のためのメナキノン）によって酸化されます。48位の高度に保存されたアルギニン残基をヒスチジンまたはシステインに変化させるDSBBミスセンス変異の分離について説明します。これらの変異体では、DSBBは有酸素的ではあるが嫌悪的に合理的によく機能します。この条件付き表現型と一致して、精製されたR48Hは、メナキノンと非常に低い活性を示し、ウビキノンの見かけのミカリス定数（K（M））は野生型DSBBのそれよりも7倍大きくなり、DSBA類似の類似のK（M）を維持します。野生型酵素のそれに。これらの結果から、DSBBのこの高度に保存されたアルギニン残基は、DSBBとキノンとの相互作用におけるその役割を通じて、ジスルフィド結合形成の触媒において重要な役割を果たすことを提案します。

The active-site cysteines of DsbA, the periplasmic disulfide-bond-forming enzyme of Escherichia coli, are kept oxidized by the cytoplasmic membrane protein DsbB. DsbB, in turn, is oxidized by two kinds of quinones (ubiquinone for aerobic and menaquinone for anaerobic growth) in the electron-transport chain. We describe the isolation of dsbB missense mutations that change a highly conserved arginine residue at position 48 to histidine or cysteine. In these mutants, DsbB functions reasonably well aerobically but poorly anaerobically. Consistent with this conditional phenotype, purified R48H exhibits very low activity with menaquinone and an apparent Michaelis constant (K(m)) for ubiquinone seven times greater than that of the wild-type DsbB, while keeping an apparent K(m) for DsbA similar to that of wild-type enzyme. From these results, we propose that this highly conserved arginine residue of DsbB plays an important role in the catalysis of disulfide bond formation through its role in the interaction of DsbB with quinones.