サイクリンBおよびCut2破壊の不活性化における開始遺伝子特異的転写因子複合体の役割

分裂酵母におけるCdc2の過活性化により、細胞は有糸分裂大惨事と呼ばれる致死的な早期有糸分裂を受けます。この表現型は、高温のCDC2-3W Wee1-50細胞で観察されます。この表現型を抑制する17の変異体のうち11匹は、単一の補完グループMCS1を定義します。MCS1-77変異体はまた、Wee1およびMik1チロシンキナーゼの致死不活性化を抑制し、CDC2チロシンのリン酸化とは無関係に有糸分裂を遅らせます。MCS1-77 CDC25-22細胞の細胞周期停止表現型の抑制因子を分離することにより、MCS1をクローン化し、START遺伝子特異的転写因子複合MBF（DSC-1としても知られている）の成分であるRES2をコードすることがわかりました。MCS1-77変異体は、グリシン68をセリン残基に置き換える原因となるRES2のDNA結合ドメインに単一点変異を負担します。重要なことに、Anaphase促進複合体（APC）の2つの基質、主要なB型サイクリン、CDC13、およびANASHASE阻害剤CUT2は、G2相MCS1-77細胞では不安定です。これと一致して、制限温度でMCS1-77 CDC25-22細胞で異常な姉妹染色分離分離を観察します。CDC10またはRES1のいずれかの突然変異は、MBF依存性転写も抑制し、G2遅延を引き起こします。この細胞周期の遅延は、APCレギュレーターSTE9/SRW1の非存在下で廃止され、STE9/SRW1の周期的な発現がMBF複合体によって制御されることがわかります。これらのデータは、分裂酵母では、MBF複合体が、APC調節因子の周期的な生産を制御することにより、サイクリンBおよびCut2破壊の不活性化に重要な役割を果たすことを示唆しています。

Hyperactivation of Cdc2 in fission yeast causes cells to undergo a lethal premature mitosis called mitotic catastrophe. This phenotype is observed in cdc2-3w wee1-50 cells at high temperature. Eleven of 17 mutants that suppress this phenotype define a single complementation group, mcs1. The mcs1-77 mutant also suppresses lethal inactivation of the Wee1 and Mik1 tyrosine kinases and thus delays mitosis independently of Cdc2 tyrosine phosphorylation. We have cloned mcs1 by isolating suppressors of the cell cycle arrest phenotype of mcs1-77 cdc25-22 cells and found that it encodes Res2, a component of the START gene-specific transcription factor complex MBF (also known as DSC-1). The mcs1-77 mutant bears a single point mutation in the DNA-binding domain of Res2 that causes glycine 68 to be replaced by a serine residue. Importantly, two substrates of the anaphase-promoting complex (APC), the major B-type cyclin, Cdc13, and the anaphase inhibitor, Cut2, are unstable in G2-phase mcs1-77 cells. Consistent with this, we observe abnormal sister chromatid separation in mcs1-77 cdc25-22 cells at the restrictive temperature. Mutation of either Cdc10 or Res1 also deregulates MBF-dependent transcription and causes a G2 delay. We find that this cell cycle delay is abolished in the absence of the APC regulator Ste9/Srw1 and that the periodic expression of Ste9/Srw1 is controlled by the MBF complex. These data suggest that in fission yeast the MBF complex plays a key role in the inactivation of cyclin B and Cut2 destruction by controlling the periodic production of APC regulators.