蛍光相関分光法を使用した酵素阻害アッセイ：ミカエリス定数よりもはるかに低い基質濃度でのKCAT/kmおよびKI値の導出のための新しいアルゴリズム

K（M）よりもはるかに低い基質濃度を持つ酵素速度の測定に基づいて、K（CAT）以上のK（M）比の計算を可能にする新しい数学的形式が推定されます。方程式は、阻害剤分子の結合定数k（i）を生成する酵素活性に対する阻害剤の作用にも適用されます。新しい理論的アプローチの実用的な評価のために、CD45ホスファターゼの酵素反応は、K（I）値決定スキームをテストするための既知の阻害剤を備えたよく特性化されたモデルシステムとして使用されました。k（cat）/k（m）比は、阻害剤分子PKF52-524のk（ - ）（1）、k（ - ）（1）である4.7 x 10（5）m（ - ）（1）であると切断されました。（1-2）x 10（ - ）（7）mであり、CD45ホスファターゼに対する阻害剤PKF52-524の関連率は59 m（ - ）（1）s（ - ）（1）と推定されました。

A new mathematical formalism is deduced which allows for the calculation of the k(cat) over K(M) ratio based on measurements of the enzyme kinetics with substrate concentrations much lower than K(M). The equations are also applied on the action of an inhibitor on enzyme activity yielding the binding constant, K(i), of an inhibitor molecule. For practical evaluation of the new theoretical approach, the enzymatic reaction of CD45 phosphatase was used as a well-characterized model system with known inhibitors for testing the K(i) value determination scheme. The k(cat)/K(M) ratio was calulated to be 4.7 x 10(5) M(-)(1) s(-)(1), the K(i) of the inhibitor molecule PKF52-524 was estimated to be (1-2) x 10(-)(7) M and the association rate of the inhibitor PKF52-524 to CD45 phosphatase was estimated to be 59 M(-)(1) s(-)(1).