非長末端リピートレトロトランスポゾンTRAS1のエンドヌクレアーゼによるテロメアリピート（TTAGG）（N）の配列固有の認識と切断

カイコのテロメアは、Bombyx Moriのテロメア（TTAGG/CCTAA）（N）で構成されており、TRAS1やSART1などの多数のテロメリック反復非長末端リピートレトロ配偶子を繰り返します。これらのレトロトランスポゾンがシーケンス固有の方法でテロメアの繰り返しを認識し、統合する方法を理解するために、標的DNAを消化することになっているTRAS1（TRAS1 EN）のアプリニックアピリミジン酸エンドヌクレアーゼ様エンドヌクレアーゼドメインを発現させ、酵素主義を特徴づけることになっています。プロパティ。精製されたTRAS1 ENは、（TTAGG）（n）ストランド（下部鎖）のtとaの間のテロメアリピートシーケンスの両方のストランドに特定のニックを生成でき、（cctaa）（n）鎖（上部鎖）のCとtの間に生成できます。。これらのサイトは、TRAS1の境界領域のゲノム構造から予想される挿入部位と一致しています。両方の鎖でのニッキング活動の時間経過研究により、下部鎖の切断が上部鎖の切断に先行することが明らかになり、ターゲットプライミングされた逆転写モデルをサポートしています。TRAS1 ENは、テロマーリピートを長い路の非脱毛型配列が隣接していても、テロメアリピートを特異的に切断することができ、TRAS1要素のターゲット部位特異性が主にそのENドメインによって決定されたことを示しています。突然変異分析に基づいて、TRAS1 ENは初期切断部位（上流7 bpおよび下流3 bp）の周りで10 bp未満を認識し、GTTAGシーケンスは特に底部の切断反応に不可欠です（5 '。3 '）。最初に特定されたエンドヌクレアーゼ消化テロメアリピートであるTRAS1 ENは、昆虫や他のいくつかの生物のテロメアを短縮するための遺伝子ツールとして使用できます。

The telomere of the silkworm Bombyx mori consists of (TTAGG/CCTAA)(n) repeats and harbors a large number of telomeric repeat-specific non-long terminal repeat retrotransposons, such as TRAS1 and SART1. To understand how these retrotransposons recognize and integrate into the telomeric repeat in a sequence-specific manner, we expressed the apurinic-apryrimidinic endonuclease-like endonuclease domain of TRAS1 (TRAS1 EN), which is supposed to digest the target DNA, and characterized its enzymatic properties. Purified TRAS1 EN could generate specific nicks on both strands of the telomeric repeat sequence between T and A of the (TTAGG)(n) strand (bottom strand) and between C and T of the (CCTAA)(n) strand (top strand). These sites are consistent with insertion sites expected from the genomic structure of boundary regions of TRAS1. Time course studies of nicking activities on both strands revealed that the cleavages on the bottom strand preceded those on the top strand, supporting the target-primed reverse transcription model. TRAS1 EN could cleave the telomeric repeats specifically even if it was flanked by longer tracts of nontelomeric sequence, indicating that the target site specificity of the TRAS1 element was mainly determined by its EN domain. Based on mutation analyses, TRAS1 EN recognizes less than 10 bp around the initial cleavage site (upstream 7 bp and downstream 3 bp), and the GTTAG sequence especially is essential for the cleavage reaction on the bottom strand (5'. TTAGGTT downward arrow AGG. 3'). TRAS1 EN, the first identified endonuclease digesting telomeric repeats, may be used as a genetic tool to shorten the telomere in insects and some other organisms.