複数のシグナル伝達経路は、原発性内皮細胞における単球化学誘引物質タンパク質-1遺伝子のNF-カッパ依存性転写を調節します

サイトカイン誘発C-Cケモカイン単球化学誘引剤タンパク質-1（MCP-1）は、炎症性課題の部位に対する白血球動員の重要な調節因子です。ここでは、腫瘍壊死因子アルファ（TNFALPHA）と同様に、広く分布している接触ハプテンNICL（2）が、MCP-1の誘導を介して原発性ヒト内皮細胞の単球化学誘引物質活性を誘導することが実証されています。NICL（2）急速に活性化されたマイトジェン活性化タンパク質（MAP）キナーゼP38、およびp38の阻害は、NICL（2）誘発MCP-1メッセンジャーRNAおよびタンパク質発現を部分的にブロックしました。NICL（2）とTNFALPHA誘発MCP-1合成の両方は、ホスファチジルコリン依存性ホスホリパーゼC（PC-PLC）の阻害剤であるD609に敏感でした。NICL（2）誘導MCP-1合成には、プロモーター内のNF-Kappab結合部位の変異が誘導性プロモーター活性を完全に喪失したため、NF-Kappabの活性化が必要でした。その発見と一致して、NICL（2）またはTNFALPHAによる刺激は、イカッパブキナーゼベータ（イククベタ）を活性化し、ドミナントネガティブイククベタの過渡的なトランスフェクションはNICL（2） - およびTNFALPHA誘発MCP-1発現を強く阻害しました。ただし、D609および特定のP38阻害剤SB202190は、NICL（2）およびTNFALPHA誘発性のイクベタ活性化、NF-Kappab DNA結合活性、またはGAL4P65融合タンパク質の転写活性に影響しませんでした。これは、p38およびPC-PLC依存性経路が転写複合体のNF-Kappab因子の転写活性を直接調節することを示しています。それと一致して、p38の阻害は、転写コアクチベーターp300によって誘導される転写活性の増強をブロックしました。したがって、少なくとも3つの独立した経路が内皮細胞でMCP-1発現を調節すると結論付けられました。その誘導には、Ikkbeta/Ikappabalpha/Nf-Kappabシグナル伝達経路の活性化が必要であり、P65の核蓄積とその後の補因子の動員をもたらします。この転写複合体の適切なアセンブリと活性は、P38 MAPキナーゼカスケードとPC-PLC依存性経路によってさらに調節されます。

The cytokine-induced C-C chemokine monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) is an important regulator of leukocyte recruitment to sites of inflammatory challenge. Here, it is demonstrated that the widely distributed contact hapten NiCl(2), like tumor necrosis factor alpha (TNFalpha), induces monocyte-chemoattractant activity in primary human endothelial cells via induction of MCP-1. NiCl(2) rapidly activated mitogen-activated protein (MAP) kinase p38, and inhibition of p38 partially blocked NiCl(2)-induced MCP-1 messenger RNA and protein expression. Both NiCl(2)- and TNFalpha-induced MCP-1 synthesis was sensitive to D609, an inhibitor of phosphatidylcholine-dependent phospholipase C (PC-PLC). NiCl(2)-induced MCP-1 synthesis required activation of NF-kappaB since mutation of NF-kappaB-binding sites in the promoter resulted in complete loss of inducible promoter activity. Consistent with that finding, stimulation with NiCl(2) or TNFalpha activated IkappaB kinase-beta (IKKbeta), and transient transfection of dominant-negative IKKbeta strongly inhibited NiCl(2)- and TNFalpha-induced MCP-1 expression. However, D609 and the specific p38 inhibitor SB202190 did not affect NiCl(2)- and TNFalpha-induced IKKbeta activation, NF-kappaB DNA-binding activity, or transcriptional activity of a Gal4p65 fusion protein. This indicates that p38- and PC-PLC-dependent pathways directly regulate the transcriptional activity of NF-kappaB factors in the transcriptional complex. Consistent with that, inhibition of p38 blocked enhanced transcriptional activity induced by the transcriptional coactivator p300. Thus, it was concluded that at least 3 independent pathways regulate MCP-1 expression in endothelial cells. Its induction requires activation of the IKKbeta/IkappaBalpha/NF-kappaB signaling pathway, resulting in nuclear accumulation of p65 and subsequent recruitment of cofactors. Proper assembly and activity of this transcriptional complex is further modulated by the p38 MAP kinase cascade and a PC-PLC-dependent pathway.