LCK近位プロモーター活性の発現によって視覚化されたマウス成体胸腺の初期の亜集団におけるT細胞系統の制限の進行

LCKの近位プロモーターは、T細胞のみに遺伝子発現を指示します。LCK近位プロモーター活性の発達調節とT細胞系統のコミットメントとの関係を調査するために、GFP発現がLCKの近位プロモーターの制御下にある緑色蛍光タンパク質（GFP）トランスジェニック（TG）マウスが作成されました。成人GFP-TGマウスでは、CD4（+）CD8（+）およびCD4（+）CD8（ - ）胸腺細胞の90％を超え、CD4（ - ）CD8（+）およびCD4（ - ）CD8の大部分（ - ）[二重陰性（DN）]胸腺細胞はGFPにとって非常に陽性でした。GFPのわずかに低いが実質的なレベルの発現レベルも成熟した脾臓T細胞で観察されました。成熟および未熟なB細胞、CD5（+）B細胞、およびNK細胞を含む非T系統サブセットでは、GFP（+）細胞は検出されず、プロモーターの保存組織特異性を示しています。検出された初期のGFP（+）細胞は、CD44（+）CD25（ - ）DN胸腺亜集団で見つかりました。CD44（+）CD25（ - ）DN画分のGFP（ - ）およびGFP（+）細胞の発達の可能性を、in vitro培養システムを使用して調べました。GFP（ - ）およびGFP（+）細胞の両方から、かなりの数のアルファベトおよびガンマデルタT細胞の生成が実証されました。ただし、GFP（+）CD44（+）CD25（ - ）DN胸腺細胞からB細胞または樹状細胞の発生は検出されませんでした。これらの結果は、CD44（+）CD25（ - ）DN胸腺サブセットでLCK近位プロモーター活性を発現する前駆細胞が、Bおよび樹状細胞系統の前駆細胞の可能性のほとんどを失ったことを示唆しています。したがって、初期の胸腺集団におけるT細胞系統制限の進行は、LCK近位プロモーター活性によって視覚化でき、T細胞系統のコミットメントにおけるLCKの潜在的な役割を示唆しています。

The proximal promoter of lck directs gene expression exclusively in T cells. To investigate the developmental regulation of the lck proximal promoter activity and its relationship to T cell lineage commitment, a green fluorescence protein (GFP) transgenic (Tg) mouse in which the GFP expression is under the control of the proximal promoter of lck was created. In the adult GFP-Tg mice, >90% of CD4(+)CD8(+) and CD4(+)CD8(-) thymocytes, and the majority of CD4(-)CD8(+) and CD4(-)CD8(-) [double-negative (DN)] thymocytes were highly positive for GFP. Slightly lower but substantial levels of expression of GFP was also observed in mature splenic T cells. No GFP(+) cells was detected in non-T lineage subsets, including mature and immature B cells, CD5(+) B cells, and NK cells, indicating a preserved tissue specificity of the promoter. The earliest GFP(+) cells detected were found in the CD44(+)CD25(-) DN thymocyte subpopulation. The developmental potential of GFP(-) and GFP(+) cells in the CD44(+)CD25(-) DN fraction was examined using in vitro culture systems. The generation of substantial numbers of alphabeta and gammadelta T cells as well as NK cells was demonstrated from both GFP(-) and GFP(+) cells. However, no development of B cells or dendritic cells was detected from GFP(+) CD44(+)CD25(-) DN thymocytes. These results suggest that the progenitors expressing lck proximal promoter activity in the CD44(+)CD25(-) DN thymocyte subset have lost most of the progenitor potential for the B and dendritic cell lineage. Thus, progression of T cell lineage restriction in the earliest thymic population can be visualized by lck proximal promoter activity, suggesting a potential role of Lck in the T cell lineage commitment.