機能的に活性なFCRNの発現と、ヒト胎盤内皮細胞におけるIgGの分化した双方向輸送

胎盤間質から胎児血管の内腔への免疫グロブリンGの選択的輸送のメカニズムはまだ解明されていません。特定の輸送と血液中のIgGレベルの調節は、IgGのFCドメインのMHCクラスI関連の受容体FCRNを含むと仮定されました。ヒト胎盤内皮細胞（HPEC）がFCRNを発現するかどうか、そして存在する場合、それが機能的に活性な形であるかどうかに疑問を投げかけました。実験は培養HPECで行われ、陽性対照として、ヒト栄養芽球（JEG3）およびマウス内皮細胞（SVEC）を使用しました。FCRNの発現は、間接免疫蛍光とRT-PCRによって実証されました。FCRNの役割は、[（125）i] -higgまたは[（125）i] -Rf（ab '）（2）頂端から底外側表面への断片の経細胞輸送を定量化することにより評価されました。二重チャンバーシステムのフィルターで成長したHPEC。FCRNまたはIgGの細胞内経路は、それぞれ5 nMおよび20 nMのコロイド金粒子に吸着されたタンパク質を使用して、電子顕微鏡で検査されました。結果は、（a）FCRNは、機能的に活性な形で、ヒト胎盤内皮細胞によって発現されることを示しました。（b）HPECにおけるIgGのトランスサイトーシスは、基底外側から先端コンパートメントまで優先的に行われる時間依存プロセスです。（c）IgGとFCRNの両方が、細胞内エンドサイトーシスコンパートメント、クロロキン感受性に共局在する。一緒にこれらのデータは、内皮細胞によるIgGレベルの調節が、分子の救助、エキソサイトーシス、およびトランスサイトーシスとの相互作用に起因する可能性があることを示唆しています。FCRNに結合しないIgGは破壊に運命づけられている可能性があると仮定することができ、これはIgG恒常性が維持されるメカニズムを説明するでしょう。

The mechanism of selective transport of the immunoglobulins G from the placental stroma to the lumen of the fetal blood vessels has not been elucidated yet. It was postulated that the specific transport as well as the regulation of IgG level in the blood, involves the MHC class I related receptor FcRn for the Fc domain of IgG. We questioned whether human placental endothelial cells (HPEC) express FcRn and, if present, whether it is in a functionally active form. The experiments were performed on cultured HPEC and as positive control, human trophoblastic (JEG3) and mouse endothelial cells (SVEC) were used. Expression of FcRn, was demonstrated by indirect immunofluorescence and RT-PCR. The role of FcRn was assessed by quantifying the transcellular transport of [(125)I]-hIgG or [(125)I]-rF(ab')(2) fragments from the apical to basolateral surface, and in the reverse direction of HPEC grown on filters in a double chamber system. The intracellular pathway of FcRn or IgG was examined by electron microscopy using the proteins adsorbed to 5 nm and 20 nm colloidal gold particles, respectively. The results showed that: (a) FcRn is expressed by human placental endothelial cells, in a functionally active form; (b) transcytosis of IgG in HPEC is a time-dependent process that takes place preferentially from the basolateral to the apical compartment; and (c) both IgG and FcRn colocalize in an intracellular endocytic compartment, chloroquine sensitive. Together these data suggest that the regulation of IgG level by endothelial cells may result from interplay between salvaging, exocytosis, and transcytosis of the molecules. One can assume that IgG that does not bind to FcRn may be destined for destruction, and this would explain the mechanism by which IgG homeostasis is maintained.