分離した白血球におけるガンマ - アミノ酪酸（GABA）トランスアミナーゼの安定アイソトープ希釈アッセイの発生と、GABAおよびベータアラニントランスアミナーゼが同一であるという証拠が同一であるという証拠

背景：ガンマアミノ酪酸トランスアミナーゼ（GABA-T）活性を測定するためのいくつかの方法が公開されていますが、これらの方法は、放射性同位体の使用のために実行不可能なか、白血球抽出物の小さな酵素活性を決定するために不十分に敏感です。直接的で敏感な酵素法を開発しました。 方法：[15N] GABAおよびα-ケトグルタル酸に由来する[15N]グルタミン酸の測定のための安定したアイソトープ希釈法を開発しました。[15N]グルタミン酸の分析方法は、この分析物をインキュベーションサンプルから分離するための固相抽出手順を含んでいた。誘導体化後、[15N]グルタミン酸は、その2H5標識内部標準と比較して、ガスクロマトグラフィマス分光測定によって定量化されました。[15N] GABAに加えて、[15N]ベータアラニンは共存していました。 結果：GABA-T欠損リンパ芽球は、基質として[15N] GABAと[15N]ベータアラニンの両方を含む酵素活性の低下を示しました。ビガバトリンは、両方の基質の酵素活性を阻害しました。 結論：GABA-Tの活性は、[15N]グルタミン酸の形成を測定して、15N標識基質を使用した手順によって正確に決定できます。[15N]ベータアラニンの結果は、GABAおよびベータアラニントランスアミナーゼが同一であることを示しています。

BACKGROUND: Several methods have been published for measuring gamma-aminobutyric acid transaminase (GABA-T) activity, but these methods are either impracticable because of the use of radioisotopes or insufficiently sensitive to determine small enzyme activities in leukocyte extracts. We developed a direct and sensitive enzyme method. METHODS: We developed a stable-isotope dilution method for the measurement of [15N]glutamic acid derived from [15N]GABA and alpha-ketoglutaric acid, catalyzed by GABA-T. The method for analysis of [15N]glutamic acid comprised a solid-phase extraction procedure to isolate this analyte from incubation samples. After derivatization, [15N]glutamic acid was quantified by gas chromatography-mass spectrometry relative to its 2H5-labeled internal standard. In addition to [15N]GABA, [15N]beta-alanine was a cosubstrate. RESULTS: GABA-T-deficient lymphoblasts showed diminished enzyme activity, with both [15N]GABA and [15N]beta-alanine as substrate. Vigabatrin inhibited the enzyme activity for both substrates. CONCLUSIONS: The activity of GABA-T can be accurately determined by our procedure using 15N-labeled substrate, measuring the formation of [15N]glutamic acid. Our results with [15N]beta-alanine indicate that GABA and beta-alanine transaminases are identical.