亜鉛フィンガータンパク質による乳房組織におけるヒトアロマターゼ遺伝子のプロモーター13活性のダウンレギュレーション、カタツムリ（SNAH）

アロマターゼ（エストロゲンシンテターゼ）は乳がん組織で発現し、酵素のその場発現は乳がんの成長を刺激します。プロモーターi.3は、乳がん組織におけるアロマターゼの発現を制御する主要なプロモーターの1つです。ヒト乳房組織ハイブリッドcDNA発現ライブラリーをスクリーニングするために酵母1ハイブリッドアプローチを使用して、亜鉛フィンガー転写因子カタツムリ（SNAH）がヒトアロマターゼ遺伝子のプロモーターI.3近くの調節領域と相互作用することがわかりました。大腸菌で発現した組換えSNAHタンパク質を使用したDNA移動性シフトアッセイと突然変異分析は、このタンパク質がプロモーターIの転写開始部位から66〜76 bpの上流にあるセグメント5'-CTGATGAAGT-3 'と相互作用することを明らかにしました。3。哺乳類の細胞トランスフェクション実験を使用して、SNAHはプロモーターI.3活性の抑制剤として作用することがわかりました。サイト指向の突然変異誘発実験により、NH2末端SNAGドメインがSNAHのリプレッサー活性にとって重要であることが明らかになりました。アロマターゼの発現に対する阻害活性を実証するために、安定したSNAH発現MDA-MB-231乳癌細胞株が生成され、SNAHトランスフェクトされた細胞株のアロマターゼRNAメッセージは、ベクターのものの30％であることがわかりました。トランスフェクトされた細胞株。12の細胞株から分離されたRNAの逆転写PCR分析により、SNAHは乳癌細胞株よりも正常な乳房上皮細胞および間質線維芽細胞株でより高いレベルで発現していることが確認されています。さらに、SNAH mRNAは、55の乳がん標本のうち16のみで検出されました。一方、アロマターゼmRNAは55個の標本のうち54個で検出されました。我々の結果は、SNAHがプロモーターi.3の機能を抑制することにより、正常乳房組織におけるアロマターゼの発現をダウンレギュレートするリプレッサーとして作用することを示しています。乳がん組織におけるSNAHの発現の減少は、通常の乳房組織におけるこのタンパク質の癌を保護する役割をさらに示唆しています。

Aromatase (estrogen synthetase) is expressed in breast cancer tissue, and in situ expression of the enzyme stimulates breast cancer growth. Promoter I.3 is one of the major promoters that control the expression of aromatase in breast cancer tissue. Using the yeast one-hybrid approach to screen a human breast tissue hybrid cDNA expression library, we found that the zinc-finger transcriptional factor Snail (SnaH) interacted with a regulatory region near promoter I.3 of the human aromatase gene. DNA mobility shift assays and mutation analyses using recombinant SnaH protein expressed in Escherichia coli have revealed that this protein interacts with a segment, 5'-CTGATGAAGT-3', which is between 66 and 76 bp upstream from the transcriptional start site of promoter I.3. Using mammalian cell transfection experiments, SnaH was found to act as a repressor of promoter I.3 activity. Site-directed mutagenesis experiments have revealed that the NH2-terminal SNAG domain is important for the repressor activity of SnaH. To demonstrate the inhibitory activity against aromatase expression, a stable SnaH-expressing MDA-MB-231 breast cancer cell line was generated, and the aromatase RNA messages in the SnaH-transfected cell line were found to be 30% of those in the vector-transfected cell line. Reverse transcription-PCR analysis on RNAs isolated from 12 cell lines has confirmed that SnaH is expressed at a higher level in normal breast epithelial cell and stromal fibroblast cell lines than in breast cancer cell lines. In addition, SnaH mRNA was detected in only 16 of 55 breast cancer specimens. On the other hand, aromatase mRNA was detected in 54 of the 55 specimens. Our results indicate that SnaH acts as a repressor that down-regulates the expression of aromatase in normal breast tissue by suppressing the function of promoter I.3. A reduction of the expression of SnaH in breast cancer tissue further suggests a cancer-protective role for this protein in normal breast tissue.