Dictyostelium BCR/ABR関連タンパク質DRGは、RACとRAB依存の両方の経路を調節します

dictyostelium discoideum ddracgap1（DRG）には、哺乳類のBCRおよびABRと共有する機能であるRho-GefドメインとRho-gapドメインの両方が含まれています。この多機能タンパク質の生理学的役割を解明するために、in vitroで組換えDRGフラグメントの酵素活性を特徴づけ、DRGヌル細胞を作成し、DRGデプレット細胞とDRGによって示される表現型変化を分析することにより、in vivoでのタンパク質の機能を研究しました。-DRGまたはDRGフラグメントで補完されたヌル細胞。我々の結果は、DRG-GEFがRAC1依存性シグナル伝達経路を介してF-アクチンダイナミクスとcAMP誘導F-アクチン形成を調節することを示しています。DRGのレースギャップアクティビティは、適切な細胞質分裂を発生させるために必要です。さらに、DRGの特異性が小さなGTPaseのRhoファミリーのメンバーに限定されないという証拠を提供します。組換えDRG-GAPは、in vitroで30倍のRABDのGTP加水分解を加速し、私たちの補完研究は、Dictyosteliumの収縮性液胞システムのRABD依存性調節にDRG-GAP活性が必要であることを示しています。

Dictyostelium discoideum DdRacGap1 (DRG) contains both Rho-GEF and Rho-GAP domains, a feature it shares with mammalian Bcr and Abr. To elucidate the physiological role of this multifunctional protein, we characterized the enzymatic activity of recombinant DRG fragments in vitro, created DRG-null cells, and studied the function of the protein in vivo by analysing the phenotypic changes displayed by DRG-depleted cells and DRG-null cells complemented with DRG or DRG fragments. Our results show that DRG-GEF modulates F-actin dynamics and cAMP-induced F-actin formation via Rac1-dependent signalling pathways. DRG's RacE-GAP activity is required for proper cytokinesis to occur. Additionally, we provide evidence that the specificity of DRG is not limited to members of the Rho family of small GTPases. A recombinant DRG-GAP accelerates the GTP hydrolysis of RabD 30-fold in vitro and our complementation studies show that DRG-GAP activity is required for the RabD-dependent regulation of the contractile vacuole system in Dictyostelium.