VSV-G偽型レトロウイルスベクターの使用マウスの骨形成細胞を標的とする

骨髄間質細胞（MSC）および新生児のカルバリアル細胞は、成熟した骨芽細胞のマーカーを分化および発現する可能性があります。さらに、MSCは複数の分化した結合組織表現型を生成できます。これらの特性とエクスビボを拡張する能力は、それらをex vivo遺伝子治療のための優れたモデルにします。この研究では、骨髄骨髄および新生児カルバリアに由来する骨前腫瘍細胞を輸送するための小胞口内炎ウイルス（VSV-G）偽型レトロウイルスベクターの能力を調べました。ベータガラクトシダーゼまたは緑色蛍光タンパク質（EGFP）のいずれかをコードするレトロベクターは、原発性マウス骨髄間質および新生児のカルバリアル細胞培養の形質導入に使用されました。GFPがマーカーとして使用された場合、またはベータガラクトシダーゼ陽性細胞の数を推定した場合、蛍光活性化細胞分析により、高い感染効率が実証されました。Col1a1、骨シアロタンパク質、およびオステオカルシンmRNAおよびアルカリホスファターゼ活性を含む分化した骨細胞のマーカーの発現は、レトロウイルス形質導入によって損なわれませんでした。私たちのデータは、VSV-G偽型レトロウイルスベクターが、骨形成剤の系統の進行に影響を与えることなく、骨形成細胞に遺伝子を導入するのに適していることを示唆しています。

Marrow stromal cells (MSC) and neonatal calvarial cells have the potential to differentiate and express markers of mature osteoblasts. Furthermore, MSCs can generate multiple differentiated connective tissue phenotypes. These properties and their ability to be expanded ex vivo make them good models for ex vivo gene therapy. In this study we examined the ability of vesicular stomatitis virus (VSV-G) pseudotyped retroviral vectors to transduce osteoprogenitor cells derived from bone marrow and from neonatal calvaria. Retrovectors encoding either beta-galactosidase or green fluorescent protein (eGFP) were used for transduction of primary murine marrow stromal and primary neonatal calvarial cell cultures. High infection efficiency was demonstrated by fluorescence-activated cell analysis when GFP was used as a marker or by estimating the number of beta-galactosidase-positive cells. Expression of markers of differentiated bone cells, including Col1a1, bone sialoprotein, and osteocalcin mRNA and alkaline phosphatase activity was not impaired by retroviral transduction. Our data suggest that VSV-G pseudotypes retroviral vectors are suitable for introducing genes into osteoprogenitor cells without affecting osteoprogenitor lineage progression.